EBV转化淋巴母细胞中CXCR4，c-FOS，FYN，PTPN11基因表达检测与分析

发布时间：2017-05-04 18:08

  本文关键词：EBV转化淋巴母细胞中CXCR4，c-FOS，，FYN，PTPN11基因表达检测与分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]前期课题组筛选出EBV诱导淋巴细胞转化的4个关键分子,分别是CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因。本课题通过荧光定量PCR和Western blot技术检测正常人淋巴细胞和体外EBV转化淋巴母细胞中CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11差异表达情况,验证前期课题组基因芯片结果,为EB病毒转化淋巴细胞的分子机制提供实验依据。[方法]采集7例健康献血员外周静脉血并从中分离出正常人淋巴细胞,用EBV体外诱导淋巴细胞转化,构建永生化的淋巴母细胞模型。提取EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞的蛋白及RNA,应用Western blot和荧光定量PCR方法,检测CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV体外转化的淋巴母细胞及配对的健康成人正常淋巴细胞中的表达。[结果]本实验成功建立了7例EBV转化淋巴母细胞样细胞系,并检测了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV转化淋巴母细胞及配对的正常人淋巴细胞中的表达情况。CXCR4基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞CXCR4的m RNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.718倍,差异具有统计学意义(P0.01);Western blot结果显示,CXCR4在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调1.894倍,差异具有统计学意义(P0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞中c-FOS的m RNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.641倍,差异具有统计学意义(P0.01);Western blot结果显示,c-FOS在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.323倍,差异具有统计学意义(P0.01)。FYN基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞中FYN的m RNA与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.451倍,差异具有统计学意义(P0.01);Western blot结果显示,FYN在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达下调2.019倍,差异具有统计学意义(P0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴细胞及转化淋巴母细胞中均有表达,转化细胞PTPN11的m RNA与正常人淋巴细胞相比,表达上调2.057倍,差异具有统计学意义(P0.01);Western Blot结果显示,PTPN11在转化细胞中的蛋白与正常人淋巴细胞相比,表达上调2.127倍,差异具有统计学意义(P0.01)。[结论]1.CXCR4在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和m RNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。2.c-FOS在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和m RNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。3.FYN在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和m RNA转录均低于其在正常人淋巴细胞。4.PTPN11在转化淋巴母细胞中的蛋白表达和m RNA转录均高于其在正常人淋巴细胞。
【关键词】：EBV CXCR4 c-FOS FYN PTPN11 淋巴细胞转化 基因表达
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 绪论11-15
• 第2章 实验方案15-17
• 第3章 实验材料与方法17-29
• 3.1 实验材料17-19
• 3.1.1 主要试剂和耗材17
• 3.1.2 实验仪器17-18
• 3.1.3 研究对象18-19
• 3.1.4 数据处理和分析19
• 3.2 实验方法19-29
• 3.2.1 淋巴母细胞样细胞系模型建立、细胞培养及EBV提取19-22
• 3.2.2 荧光定量PCR22-24
• 3.2.3 Western Blot24-29
• 第4章 结果29-39
• 4.1 EBV体外转化淋巴母细胞29
• 4.2 实时荧光定量PCR检测EB病毒体外转化淋巴母细胞及其配对的正常人淋巴细胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11的表达29-34
• 4.2.1 数据分析结果29-30
• 4.2.2 β-actin基因结果分析30
• 4.2.3 CXCR4基因结果分析30-31
• 4.2.4 c-FOS基因结果分析31-32
• 4.2.5 FYN基因结果分析32-33
• 4.2.6 PTPN11基因结果分析33-34
• 4.3 Western Blot检测EB病毒转化淋巴细胞及其配对的正常人淋巴细胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11蛋白的表达34-39
• 第5章 讨论39-45
• 5.1 CXCR4基因39-40
• 5.2 c-FOS基因40-41
• 5.3 FYN基因41-42
• 5.4 PTPN11基因42-45
• 第6章 结论45-47
• 参考文献47-53
• 文献综述53-67
• 参考文献62-67
• 攻读硕士学位期间完成、发表论文情况67-68
• 基金68-69
• 致谢69

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本文编号：345540