乙型肝炎病毒S蛋白对人APOAⅡ基因调控及机制
发布时间：2021-10-29 23:33
乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可引起急、慢性乙型肝炎,肝硬化,并与原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）的发生发展关系密切。但其致病机制尚未明确。HBs蛋白由HBV编码的一种包膜蛋白,参与完整HBV Dane颗粒的装配、球形颗粒（secreted sphere）和管形颗粒（secreted filament）的组装,大量存在于HBV感染者血清中。研究发现HBs可影响细胞生理功能,如糖类和脂类代谢,细胞生长和细胞凋亡过程。本课题组前期通过Q-PCR的方法,检测了16种载脂蛋白（Apo）基因。其中载脂蛋白AII（Apolipoprotein A2,APOAII）在HBV稳定表达细胞株HepG2.2.15中低于对照细胞株HepG2,提示HBV可降低APOAII的表达。在此基础上,进一步讨论HBs影响APOAII的转录与表达的调控机制,有助于进一步了解HBV相关发病机理。我们首先在第一部分探讨HBV特别是HBs对APOAII mRNA水平及蛋白水平的影响。通过稳定表达HBV的细胞株及瞬时转染含有1.2倍体HBV基因组DNA,进...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV对apoAII转录及表达的影响
图 2 HBs 对 apoAII 转录水平及表达水平的影响。腺病毒 AdAd-MHBs、Ad-HBs、Ad-HBc、Ad-HBe、Ad-HBpol、Ad-HBx 和对照腺病毒 分别感染 Hep3B、Huh7 和 HepG2 细胞，感染 72 h 后提取总 RNA 和行 Q- PCR 和 Western blot 检测 apoAII mRNA 和蛋白的表达。以 β-acwestern blot 的内参，GAPDH 作为 Q- PCR 内参。*表示 P<0.05。2.2 HBs 突变可逆转 HBV 对 apoAII 转录及蛋白表达的抑制作用。为了验证 HBs 对 APOAII 作用的特异性，我们构建了 HBs 终止突组载体 pRep-1.2HBV-S(–)与 pRep-HBV、pRep-Sal 分别转染 HepG2 细染后 48h，以 Trizol 抽提细胞总 RNA，RIPA 强裂解液裂解细胞提取通过 real-time PCR 及 western blot 检测证实（图 3），HBs 突变能逆对 apoAII 的抑制作用，说明 HBs 的作用具有特异性。
对 apoAII 的转录及表达的影响。pRep-HBV转染组 apoAII 的 mRNA 和蛋白水平。以 β-aH 为 real-time PCR 内参。*表示 P<0.05。 apoAII 基因启动子活性。II 启动子全长以及海参（内参）荧光素酶表达pG2 细胞，采用双报告检测系统检测每个转染组0 和 pRL-SV40 共转染组作为阴性对照。Ad-H细胞，探讨 HBs 是否通过抑制 apoAII 基因启及表达。由图 4 可知，apoAII 基因的启动子而下调，呈剂量效应。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Association between hepatitis B and metabolic syndrome: Current state of the art[J]. Peter Jarcuska,Sylvia Drazilova,Jan Fedacko,Daniel Pella,Martin Janicko. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Hepatitis B virus infection and coronary atherosclerosis: Results from a population with relatively high prevalence of hepatitis B virus[J]. De-Yan Tong, Xiao-Hua Wang, Si-Dong Xiong, Department of Immunology, Shanghai Medical College of Fudan University, Center for Gene Immunization and Vaccine Research (Shanghai), Shanghai 200032, China Cong-Feng Xu, Ying-Zhen Yang, Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
本文编号：3465597
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
HBV对apoAII转录及表达的影响
图 2 HBs 对 apoAII 转录水平及表达水平的影响。腺病毒 AdAd-MHBs、Ad-HBs、Ad-HBc、Ad-HBe、Ad-HBpol、Ad-HBx 和对照腺病毒 分别感染 Hep3B、Huh7 和 HepG2 细胞，感染 72 h 后提取总 RNA 和行 Q- PCR 和 Western blot 检测 apoAII mRNA 和蛋白的表达。以 β-acwestern blot 的内参，GAPDH 作为 Q- PCR 内参。*表示 P<0.05。2.2 HBs 突变可逆转 HBV 对 apoAII 转录及蛋白表达的抑制作用。为了验证 HBs 对 APOAII 作用的特异性，我们构建了 HBs 终止突组载体 pRep-1.2HBV-S(–)与 pRep-HBV、pRep-Sal 分别转染 HepG2 细染后 48h，以 Trizol 抽提细胞总 RNA，RIPA 强裂解液裂解细胞提取通过 real-time PCR 及 western blot 检测证实（图 3），HBs 突变能逆对 apoAII 的抑制作用，说明 HBs 的作用具有特异性。
对 apoAII 的转录及表达的影响。pRep-HBV转染组 apoAII 的 mRNA 和蛋白水平。以 β-aH 为 real-time PCR 内参。*表示 P<0.05。 apoAII 基因启动子活性。II 启动子全长以及海参（内参）荧光素酶表达pG2 细胞，采用双报告检测系统检测每个转染组0 和 pRL-SV40 共转染组作为阴性对照。Ad-H细胞，探讨 HBs 是否通过抑制 apoAII 基因启及表达。由图 4 可知，apoAII 基因的启动子而下调，呈剂量效应。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Association between hepatitis B and metabolic syndrome: Current state of the art[J]. Peter Jarcuska,Sylvia Drazilova,Jan Fedacko,Daniel Pella,Martin Janicko. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Hepatitis B virus infection and coronary atherosclerosis: Results from a population with relatively high prevalence of hepatitis B virus[J]. De-Yan Tong, Xiao-Hua Wang, Si-Dong Xiong, Department of Immunology, Shanghai Medical College of Fudan University, Center for Gene Immunization and Vaccine Research (Shanghai), Shanghai 200032, China Cong-Feng Xu, Ying-Zhen Yang, Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
本文编号：3465597
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