呼吸道感染细菌联合疫苗制备及免疫效果评价

发布时间：2017-05-05 20:05

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【摘要】：目的研制我国小儿常见呼吸道感染细菌联合疫苗,分别对其进行体外实验与动物体内实验研究。通过检测免疫细胞增殖、细胞因子生成、细胞表型变化、小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、吞噬细胞功能和脏器指数等一系列特异性免疫功能及非特异性免疫功能的免疫学指标,探讨此联合疫苗对机体免疫功能的影响,进一步确定其影响机体免疫系统的机制,为研制我国呼吸道感染细菌联合疫苗提供理论依据。方法1制备联合疫苗分离培养我国小儿呼吸道感染常见6种细菌(溶血性链球菌、流感嗜血杆菌B型、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌),用生理盐水洗细菌三次,然后超声波破碎细菌,用饱和硫酸铵沉淀细菌蛋白,再通过透析膜去除硫酸铵,分光光度计测定蛋白含量,作为抗原。将抗原混合后用生理盐水配置成一定浓度作为联合疫苗。2体外实验1)用CCK-8法检测联合疫苗对人淋巴细胞增殖活性的影响。2)酶联免疫吸附试验(ELISA)测细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)含量;3)流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。3体内实验取SPF级小鼠40只,随机分成四组:正常对照组(NC),联合疫苗1组,联合疫苗2组,联合疫苗3组,每组10只。全部实验小鼠饲喂基础日粮,适应性喂养10天后,分别用浓度为0.1mg"ml,0.2mg"ml,0.4mg"ml联合疫苗免疫1组,2组,3组小鼠,每天上午灌服0.2ml。NC组小鼠每天灌服0.2ml生理盐水。免疫10天。然后将小鼠处死,进行免疫学实验检测。1)测定联合疫苗组小鼠巨噬细胞吞噬功能。2)观察联合疫苗对小鼠细胞免疫功能(迟发型超敏反应,DTH)的影响。3)检测联合疫苗组小鼠血清中溶血素含量的变化。4)观察联合疫苗对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响。结果1人外周血淋巴细胞增殖活性检测结果显示:各浓度联合疫苗组OD值均高于对照组,均对外周血淋巴细胞起增殖作用(P0.05),最佳浓度为50μg/ml。2细胞因子IFN-γ、IL-2检测结果显示:各浓度联合疫苗组IFN-γ、IL-2值均高于对照组(P0.05,P0.01)。最佳浓度为50μg/ml,高于此浓度时,细胞因子含量开始降低。3流式细胞仪检测CD3+细胞和CD19+细胞的结果显示:联合疫苗组CD3+细胞数与CD19+细胞数均高于对照组(P0.01)。4小鼠巨噬细胞吞噬功能检测结果显示:对照组巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别为22.5±1.95和0.32±0.20;联合疫苗组均显著高于正常对照组(P0.01)。5小鼠迟发型超敏反应检测结果显示:联合疫苗组左右后足重量差分别为21.60±2.07mg、23.36±2.65mg、25.63±3.02mg,显著高于正常对照组的16.50±2.12mg(P0.01)。6血清溶血素含量结果显示:对照组溶血素吸光度值为0.205±0.023,各浓度联合疫苗组溶血素吸光度值分别为0.219±0.018,0.236±0.022,0.258±0.015,均高于对照组(P0.01)。7各浓度联合疫苗组与对照组相比,脾脏指数和胸腺指数均显著增高(P0.01)。结论1制备的联合疫苗可提高机体免疫功能。2联合疫苗不仅能提高体液免疫功能,对细胞免疫功能也具有明显影响。
【关键词】：细菌 联合疫苗 细胞免疫 体液免疫 IFN-γ IL-2
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392.12
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-11
• 第1章 实验研究11-31
• 1.1 材料与方法11-16
• 1.1.1 主要试剂11
• 1.1.2 主要仪器设备11-12
• 1.1.3 菌种来源12
• 1.1.4 血液标本来源12
• 1.1.5 实验动物12-13
• 1.1.6 联合疫苗的制备13
• 1.1.7 体外实验13-14
• 1.1.8 体内实验14-15
• 1.1.9 统计学分析15-16
• 1.2 结果16-22
• 1.2.1 体外实验研究结果16-19
• 1.2.2 体内实验研究结果19-22
• 1.3 讨论22-27
• 1.3.1 联合疫苗对人外周血淋巴细胞增殖的影响23-24
• 1.3.2 联合疫苗对淋巴细胞亚群影响24
• 1.3.3 联合疫苗对细胞因子IL-2、IFN-γ生成的影响24-25
• 1.3.4 联合疫苗对巨噬细胞吞噬功能的影响25
• 1.3.5 联合疫苗对细胞免疫功能（迟发型超敏反应，DTH）的影响25-26
• 1.3.6 联合疫苗对小鼠血清溶血素含量的影响26
• 1.3.7 联合疫苗对小鼠脏器指数的影响26-27
• 1.4 小结27-28
• 参考文献28-31
• 第2章 综述31-46
• 2.1 联合疫苗的发展简史31-32
• 2.2 联合疫苗的概况32-39
• 2.2.1 以DTP为主的联合疫苗32-34
• 2.2.2 麻疹、风疹、腮腺炎联合疫苗（MMR）34-35
• 2.2.3 甲肝、乙肝联合疫苗（hepatitis A-hepatitis B, HepA-Hep B）35
• 2.2.4 甲型肝炎-伤寒联合疫苗35-36
• 2.2.5 肺炎球菌疫苗36-37
• 2.2.6 脑膜炎球菌多价疫苗37
• 2.2.7 轮状病毒疫苗37-38
• 2.2.8 新型联合疫苗38-39
• 2.2.9 其他联合疫苗39
• 2.3 存在的问题39-41
• 2.3.1 联合疫苗的稳定性39-40
• 2.3.2 联合疫苗的有效性40
• 2.3.3 联合疫苗的安全性40-41
• 2.4 展望41
• 参考文献41-46
• 结论46-47
• 致谢47-48
• 导师简介48-49
• 作者简介49-50
• 学位论文数据集50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：346986