CVB3 VP1阻滞Hela细胞于G1/S期的分子机制研究

发布时间：2021-11-11 23:12

　　目的:研究CVB3 VP1蛋白与宿主蛋白MAT1的相互作用对细胞功能的影响,并通过检测细胞周期素（Cyclin D1、Cyclin E1等）,细胞周期素依赖性激酶（CDK4、CDK2等）,细胞周期抑制基因p21以及视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb的表达水平,探讨VP1将Hela细胞阻滞于G1/S期的分子机制,为研究CVB3的致病机制奠定基础。方法:1.采用PCR技术扩增出VP1-D8（3044-3319bp）和VP1-D4（2459-2926bp,阴性对照）基因,将其克隆至真核表达质粒p Bud CE4.1中,构建真核表达质粒p Bud CE4.1-VP1-D4和p Bud CE4.1-VP1-D8,双酶切鉴定并DNA测序验证。2.运用免疫印迹技术,检测质粒p Bud CE4.1-VP1、p Bud CE4.1-VP1-D8、p Bud CE4.1-VP1-D4以及p Bud CE4.1空质粒对Hela细胞MAT1表达量的影响。3.利用流式细胞仪分析以上四种质粒对Hela细胞周期的影响。4.Quantative Real-Time RT-PCR检测以上四种质粒转染Hela细胞24 h后,细胞... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CDK7和MAT1相互作用的结构域Fig1ThestructureofCDK7andMAT1

AT1 存在相互作用，并将 VP1 基因进行缺失突变，采用同样的方法找出 V白中与 MAT1 相互作用的确切范围，发现 VP1 的 C 端区域（VP1-D8–859aa）是其与 MAT1 相互作用的必需区域（图 2）。然而，VP1-D8 在宿胞内是否具有阻滞细胞周期的功能还有待于进一步的证实，其中的机制又么？这是本论文研究的重点。

图 3 细胞周期调节蛋白对 G1-S 期转换基因的调节Fig 3 The regulation of cell cycle regulatory proteins on genes needed in G1-S transition基于上述研究背景及假设，本论文通过构建质粒 pBudCE4.1-VP1-D8、pBudCE4.1-VP1-D4（阴性对照）并转染 Hela 细胞，观察 MAT1 蛋白水平、细胞周期的变化、细胞周期检查点基因的表达情况以及 Rb 的磷酸化/非磷酸化水平，

【参考文献】：
期刊论文
[1]CVB3损伤HeLa细胞高尔基体结构的机制研究[J]. 金桂林,莫冰,刘发娣,徐秋芳,刘昕,应颖,赵颖洁,罗军,黄孝天.  中国人兽共患病学报. 2012(06)
[2]酵母双杂交技术筛选与CVB3 VP1直接作用的细胞蛋白[J]. 刘发娣,余克花,罗达亚,徐秋芳,莫冰,罗军,刘晶星,黄孝天.  中国人兽共患病学报. 2009(10)

硕士论文
[1]CVB3 VP1与宿主蛋白MAT1相互作用的研究[D]. 金桂林.南昌大学医学院 2013
[2]CVB3对Hela细胞高尔基体及其细胞周期的影响[D]. 刘发娣.南昌大学 2009



本文编号：3489723