人巨细胞病毒增殖性感染UL111A基因转录本特征及变化
发布时间：2021-11-15 20:44
目的:探究人巨细胞病毒（HCMV）UL111A基因在增殖性感染不同时间点的转录本特征及变化。方法:在HCMV AD169株感染人包皮成纤维细胞（HFF）12 h,24 h,48 h,3 d,5 d,7 d,9 d等不同时间点,抽提RNA,反转录成cDNA,PCR检测UL111A转录本特征。扩增产物通过克隆、测序验证不同时间点UL111A转录本的特征变化。利用真核表达载体pcDNA3.1构建UL111A 3种转录本编码区序列载体pcDNA3.1-cmv IL-10,pc DNA3.1-LAcmvIL-10以及pcDNA3.1-unspliced,Western blot验证构建的载体在293T细胞中的有效表达。结果:感染HCMV AD169株的HFF可以检测到cmvIL-10,LAcmv IL-10以及未剪切3种形式转录本。未剪切形式转录本占比最多,cmvIL-10转录本占比最少。在感染的24 h和9 d 3种转录本都有检测到,而在其他时间点未能检测到cmvIL-10转录本。此外,3种转录本的编码区序列在293T细胞中均可有效表达。结论:HCMV UL111A基因在增殖性感染不同时间点存...
【文章来源】：温州医科大学学报. 2020,50(02)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
感染AD169病毒HFF细胞24 h cDNA反转录图
UL111A 3种不同转录本mRNA和氨基酸模式图
HCMV是目前已知的最大的疱疹病毒，其编码大量病毒基因组蛋白包括细胞因子、趋化因子和它们的受体，在机体发挥相应的免疫调节功能，并且与肿瘤等疾病有密切的关联[7-10]。巨细胞病毒AD169株完整序列在1990年首次被研究报道，其编码了超过200多个蛋白质[11]。在我们的研究中首次报道了AD169病毒株感染HFF细胞后，UL111A基因在其增殖性感染的不同时间点转录本特征，通过RT-PCR和挑选单克隆实验检测到了cmvIL-10、LAcmvIL-10和未剪切形式转录本。CmvIL-10蛋白编码UL111A基因3个外显子序列的175个氨基酸，尽管它与hIL-10只有约27%的同源性，但是它可以通过与hIL-10R结合发挥免疫抑制作用，如降低单核细胞主要组织相容性复合物I(major histocompatibility complex I，MHC I）和MHC II的表达，降低内皮细胞基质金属蛋白酶的活性，损伤体外内皮细胞的迁移和细胞滋养层细胞的侵袭性[12-15]。hIL-10是一个多效价的细胞因子，在机体炎症和免疫功能发挥免疫抑制等作用[16]。LAcmvIL-10蛋白编码包含第2个内含子序列的139个氨基酸，其终止密码子在第2个内含子内，其N端127个氨基酸与cmvIL-10蛋白相同，C端12个氨基酸不同，相似的，LAcmvIL-10同样发挥一部分的免疫抑制功能，如抑制人初始骨髓细胞和单核细胞MHC II的表达[17]，然而其机制可能不同于cmvIL-10，如LAcmvIL-10不能诱导stat3的磷酸化，并且其下调MHC II不能通过hIL-10R的中和抗体拮抗，提示其可能通过其他途径发挥功能[18]。未剪切形式蛋白编码包含两个内含子序列的78个氨基酸，其终止密码子在第一个内含子内，这与先前的报道的ORF79高度同源，ORF79是HCMV Towne病毒株上的形态改变区域（mtr II），可以发挥致癌作用诱导恶性形成[19]。之前有研究报道[20]，在AD169病毒感染的MRC-5细胞中，共发现8种转录本，但是关于各自生物学功能尚未进行深入研究。我们只发现其中3种转录本，可能是由于其他转录本存在极少，因此未能检测到。UL111A基因编码的cmvIL-10蛋白最早是在感染Towne株病毒的MRC-5细胞和感染AD169病毒的HEL299细胞的增殖性感染阶段被发现[4,6]，而其编码的LAcmvIL-10蛋白则是在感染Toledo株病毒的人粒-巨噬祖细胞的潜伏感染阶段被发现，随后的研究也证明了LAcmvIL-10蛋白同样存在于感染了Toledo株病毒的HFF细胞的增殖性感染阶段[5,21]。图3 UL111A 3种不同转录本mRNA和氨基酸模式图
本文编号：3497460
【文章来源】：温州医科大学学报. 2020,50(02)
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
感染AD169病毒HFF细胞24 h cDNA反转录图
UL111A 3种不同转录本mRNA和氨基酸模式图
HCMV是目前已知的最大的疱疹病毒，其编码大量病毒基因组蛋白包括细胞因子、趋化因子和它们的受体，在机体发挥相应的免疫调节功能，并且与肿瘤等疾病有密切的关联[7-10]。巨细胞病毒AD169株完整序列在1990年首次被研究报道，其编码了超过200多个蛋白质[11]。在我们的研究中首次报道了AD169病毒株感染HFF细胞后，UL111A基因在其增殖性感染的不同时间点转录本特征，通过RT-PCR和挑选单克隆实验检测到了cmvIL-10、LAcmvIL-10和未剪切形式转录本。CmvIL-10蛋白编码UL111A基因3个外显子序列的175个氨基酸，尽管它与hIL-10只有约27%的同源性，但是它可以通过与hIL-10R结合发挥免疫抑制作用，如降低单核细胞主要组织相容性复合物I(major histocompatibility complex I，MHC I）和MHC II的表达，降低内皮细胞基质金属蛋白酶的活性，损伤体外内皮细胞的迁移和细胞滋养层细胞的侵袭性[12-15]。hIL-10是一个多效价的细胞因子，在机体炎症和免疫功能发挥免疫抑制等作用[16]。LAcmvIL-10蛋白编码包含第2个内含子序列的139个氨基酸，其终止密码子在第2个内含子内，其N端127个氨基酸与cmvIL-10蛋白相同，C端12个氨基酸不同，相似的，LAcmvIL-10同样发挥一部分的免疫抑制功能，如抑制人初始骨髓细胞和单核细胞MHC II的表达[17]，然而其机制可能不同于cmvIL-10，如LAcmvIL-10不能诱导stat3的磷酸化，并且其下调MHC II不能通过hIL-10R的中和抗体拮抗，提示其可能通过其他途径发挥功能[18]。未剪切形式蛋白编码包含两个内含子序列的78个氨基酸，其终止密码子在第一个内含子内，这与先前的报道的ORF79高度同源，ORF79是HCMV Towne病毒株上的形态改变区域（mtr II），可以发挥致癌作用诱导恶性形成[19]。之前有研究报道[20]，在AD169病毒感染的MRC-5细胞中，共发现8种转录本，但是关于各自生物学功能尚未进行深入研究。我们只发现其中3种转录本，可能是由于其他转录本存在极少，因此未能检测到。UL111A基因编码的cmvIL-10蛋白最早是在感染Towne株病毒的MRC-5细胞和感染AD169病毒的HEL299细胞的增殖性感染阶段被发现[4,6]，而其编码的LAcmvIL-10蛋白则是在感染Toledo株病毒的人粒-巨噬祖细胞的潜伏感染阶段被发现，随后的研究也证明了LAcmvIL-10蛋白同样存在于感染了Toledo株病毒的HFF细胞的增殖性感染阶段[5,21]。图3 UL111A 3种不同转录本mRNA和氨基酸模式图
本文编号：3497460
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