巨噬细胞集落刺激因子过表达对信号通路中破骨相关因子的影响

发布时间：2021-11-18 11:48

　　目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子（monocyte colony-stimulating factor,M-CSF）在SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）中过表达对破骨细胞分化形成相关细胞因子在信号通路中表达的影响。方法:构建过表达质粒载体上调M-CSF基因表达,使用增强型绿色荧光蛋白确定最佳转染剂量,并将质粒转染至BMSCs。采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）检测破骨分化特异标志物M-CSF、核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白细胞介素-1（interleukin-1,IL-1）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-24（interleukin-24,IL-24）的mRNA表达水平。结果... 

【文章来源】：口腔医学研究. 2019,35(11)北大核心

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【部分图文】：

图１ＢＭＳＣｓ的培养（×５）１ａ：原代细胞；１ｂ：第３代细胞

下观察，呈分布均匀的鱼群状或漩涡状长梭形细胞群贴壁生长。流式细胞鉴定其表面标志物ＣＤ２９阳性率为９１．４％、ＣＤ４４阳性率为８５．７％；ＣＤ４５阳性率为２％，呈阴性表达，证实观察细胞为ＢＭＳＣｓ（图１）。１ａ：原代细胞；１ｂ：第３代细胞图１ＢＭＳＣｓ的培养（×５）Ｆｉｇ．１ＴｈｅｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆＢＭＳＣｓ（×５）２．２质粒提取：限制性内切酶将环状质粒打开为线性验证质粒载体大小（５．４ｋｂ，图２）图２重组质粒电泳图Ｆｉｇ．２Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄ．２．３转染细胞毒性实验ＣＣＫ－８实验在２４、３６、４８ｈ时检测转染后细胞活性发现：９μＬＬＴＸ试剂时，细胞活力均明显低于７μＬ组及５μＬ组（Ｐ＜０．０５），且镜下观察细胞死亡最多。７μＬ组相对于５μＬ组细胞活力也下降（Ｐ＜０．０５）。根据转染率和死亡率比值，选取５μＬ转染３６ｈ为宜（图３）。图３ＣＣＫ－８检测３组细胞细胞活力Ｆｉｇ．３ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｂｙＣＣＫ－８．２．４细胞转染效率通过激光共聚焦显微镜观察转染后ＥＧＦＰ绿色荧光数量，当ＬＴＸ＞５μＬ时，ＥＧＦＰ绿色荧光随剂量增加而减少；３６ｈ后，Ｍ－ＣＳＦ过表达质粒荧光数量约８５％，阴性对照质粒荧光表达数量约７８％，此时两组细胞密度约６５％（图４）。２．５ＲＴ－ＰＣＲ实验组Ｍ－Ｃ

【参考文献】：
期刊论文
[1]高脂饮食对去卵巢大鼠骨微结构、骨IL-6及M-CSF mRNA水平的影响[J]. 薛英,王永炫.  中国现代医生. 2017(31)
[2]白细胞介素-24通过Jak-Stat通路对破骨细胞影响的实验研究[J]. 孟庆阳,孙宏晨,史册,郑嵘,李超,孟艾奇,张布,吴立鹏.  口腔医学研究. 2015(08)



本文编号：3502845