APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型的建立及鉴定
发布时间：2021-11-20 02:24
目的建立APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠,为深入研究SCN2B基因在AD发生发展中的作用提供实验工具。方法将APP/PS1转基因小鼠与SCN2B-/-转基因小鼠合笼,子代同胞兄妹交配,子代的后代中选取APP/PS1高表达和SCN2B阴性的小鼠再同胞兄妹交配,并培育。得到的目的基因的小鼠与WT小鼠对照,进行表型鉴定。运用PCR鉴定子代小鼠尾部组织基因组DNA,用RT-PCR验证Aβ和SCN2B在大脑中的蛋白的表达,通过免疫荧光观察SCN2B在转基因小鼠神经系统中的表达,最后用水迷宫在行为学上对转基因鼠进行鉴定。结果经PCR鉴定成功构建APP/PS1+SCN2B-/-转基因鼠杂交群体,并扩群培育,经免疫染色和RT-PCR分析转基因小鼠的Aβ和SCN2B在大脑中的蛋白的表达,发现Aβ在转基因鼠的海马和皮质中高表达,SCN2B在海马中几乎检测不到,免疫染色也未发现SCN2B在神经系统中的表达。水迷宫结果显示转基因鼠与同月龄野生型（WT）小鼠相比在空间记忆和认知差异有统计学意义（P<0.05）。结论成功构建APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型,从基因型、组织学表现到行为...
【文章来源】：昆明医科大学学报. 2019,40(12)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
APP/PS1/SCN2B-/-转基因鼠的基因型检测Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠基因型检测；1:DNAMarkerDL2000(从上到下分别为:2000bp，1000bp，750bp，500ABSCN
?停現ounder：APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系，共4个品系，分别为Founder14、Founder20、Founder32、Founder28。图1APP/PS1/SCN2B-/-转基因鼠的基因型检测Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠基因型检测；1:DNAMarkerDL2000(从上到下分别为:2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp)。2～6:转基因鼠的鼠尾DNAPCR扩增产物，2:Founder14，3:Founder20，4:Founder32，5:Founder28，6:WT。B:RT-PCR测APP-PS1-SCN2B-转基因组各品系小鼠海马SCN2B的相对表达量。与WT比较，*P<0.05。图2APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠组织学表型检测Fig.2HistologicalphenotypedetectionofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA、B:分别为Aβ在野生型及APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠海马和皮质的免疫组化沉积检测；C、D:分别为APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠海马和坐骨神经SCN2B免疫染色。WT野生型，F为APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系。与WT比较，*P<0.05。ABSCN2B的相对表达量Aβ（IOD×104）Aβ（IOD×104）ABCD10昆明医科大学学报第40卷
?月自然发生海马与皮质的AB淀粉样沉积以及认知功能障碍。SCN2B是脑老化的相关基因[1]，笔者的前期研究发现SCN2B的mRNA在快速老化小鼠大脑额叶组织中呈现出增龄性表达上调的变化趋势，并且通过制作SCN2B基因Knockdown小鼠模型，发现SCN2B下调60.68%通过增加海马神经元棘突的数量，显著改善转基因小鼠海马依赖性的空间认知记忆并且有利于易化海马神经元的长时程电势，进而又发现SCN2BKnockdown可以显著减少转基因小鼠海马中APP的表达及Aβ-41，42的沉积[10，14]，提示SCN2B在AD的发病机制中有重要的作用。图3APP-PS1-SCN2B-转基因组各品系小鼠水迷宫检测结果Fig.3ThetestresultsofmicewatermazeinAPP/PS1/-SCN2B-/-TgmiceA1～A4:APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系小鼠隐蔽平台实验逃避潜伏期检测；B1～B4::APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系小鼠空间探索试验中的持续时间。与WT比较，*P<0.05。第12期檀雅欣，等．APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型的建立及鉴定11持续时间（s）持续时间（s）逃避潜伏期（s）逃避潜伏期（s）持续时间（s）持续时间（s）A1A2A3A4B1B2B3B4对角象限对角象限左边象限对角象限对角象限右边象限右边象限右边象限右边象限靶象限靶象限靶象限靶象限左边象限左边象限左边象限逃避潜伏期（s）逃避潜伏期（s）
本文编号：3506373
【文章来源】：昆明医科大学学报. 2019,40(12)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
APP/PS1/SCN2B-/-转基因鼠的基因型检测Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠基因型检测；1:DNAMarkerDL2000(从上到下分别为:2000bp，1000bp，750bp，500ABSCN
?停現ounder：APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系，共4个品系，分别为Founder14、Founder20、Founder32、Founder28。图1APP/PS1/SCN2B-/-转基因鼠的基因型检测Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠基因型检测；1:DNAMarkerDL2000(从上到下分别为:2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp)。2～6:转基因鼠的鼠尾DNAPCR扩增产物，2:Founder14，3:Founder20，4:Founder32，5:Founder28，6:WT。B:RT-PCR测APP-PS1-SCN2B-转基因组各品系小鼠海马SCN2B的相对表达量。与WT比较，*P<0.05。图2APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠组织学表型检测Fig.2HistologicalphenotypedetectionofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA、B:分别为Aβ在野生型及APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠海马和皮质的免疫组化沉积检测；C、D:分别为APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠海马和坐骨神经SCN2B免疫染色。WT野生型，F为APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系。与WT比较，*P<0.05。ABSCN2B的相对表达量Aβ（IOD×104）Aβ（IOD×104）ABCD10昆明医科大学学报第40卷
?月自然发生海马与皮质的AB淀粉样沉积以及认知功能障碍。SCN2B是脑老化的相关基因[1]，笔者的前期研究发现SCN2B的mRNA在快速老化小鼠大脑额叶组织中呈现出增龄性表达上调的变化趋势，并且通过制作SCN2B基因Knockdown小鼠模型，发现SCN2B下调60.68%通过增加海马神经元棘突的数量，显著改善转基因小鼠海马依赖性的空间认知记忆并且有利于易化海马神经元的长时程电势，进而又发现SCN2BKnockdown可以显著减少转基因小鼠海马中APP的表达及Aβ-41，42的沉积[10，14]，提示SCN2B在AD的发病机制中有重要的作用。图3APP-PS1-SCN2B-转基因组各品系小鼠水迷宫检测结果Fig.3ThetestresultsofmicewatermazeinAPP/PS1/-SCN2B-/-TgmiceA1～A4:APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系小鼠隐蔽平台实验逃避潜伏期检测；B1～B4::APP/PS1+SCN2B-/-转基因组各品系小鼠空间探索试验中的持续时间。与WT比较，*P<0.05。第12期檀雅欣，等．APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型的建立及鉴定11持续时间（s）持续时间（s）逃避潜伏期（s）逃避潜伏期（s）持续时间（s）持续时间（s）A1A2A3A4B1B2B3B4对角象限对角象限左边象限对角象限对角象限右边象限右边象限右边象限右边象限靶象限靶象限靶象限靶象限左边象限左边象限左边象限逃避潜伏期（s）逃避潜伏期（s）
本文编号：3506373
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