生殖细胞体外分化过程中LncRNA表达谱的研究
发布时间：2021-11-21 22:29
实验目的:1.建立体外诱导小鼠原始生殖样细胞（primordial germ cell-like cells,PGCLCs）分化体系。2.鉴定体外诱导小鼠原始生殖细胞分化过程中长链非编码RNA（long noncoding RNA,lnc RNA）表达量的变化。3.对小鼠原始生殖细胞诱导过程中关键长链非编码RNA进行功能预测。4.获取小鼠体内原始生殖细胞分化过程E5.5天外胚层细胞和E12.5天原始生殖细胞。实验方法:首先,我们模拟小鼠原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）体内分化生成过程,在体外经过两步诱导方法建立PGCLCs诱导体系。起始细胞我们使用小鼠胚胎干细胞（ESC）,先经过两天贴壁培养诱导成为扁平状的外胚层样细胞（Epiblastlike cells,Epi LCs）,然后取合适的细胞数量采用悬滴培养的方式继续诱导培养4-5天获得原始生殖样细胞（Primordial germ cell-like cells,PGCLCs）。我们使用PGCs分化特异性的标记基因Blimp1-GFP指示体外诱导前期阶段的成功,然后在需要收取分化样品的第4天用CD6...
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在体内，PGC来源于胚胎E6.5-7.5天的植入后外胚层细胞，响应来自胚外外胚层(extra-embryonicectoderm,ExE)的BMP和来自胚内内胚层(viscerralendoderm,VE)的BMP2信号
殖细胞与临近的体细胞区分开来。BLIMP1 突变导致 E8.5 天的胞样细胞异常，使他们更像临近的体细胞[11]，通过野生型和 BL始生殖细胞的比较，发现了 Prdm14[12]。Prdm14 突变导致异常原。从 E8.5 天 H3K9me2 的全基因组的擦除来看，这些细胞表现缺失，部分原因是 Ehmt1-Ehmt2 介导的 H3K9 甲基化转移酶活胞也表现出全基因组的 polycomb 酶 EZH2 介导的 H3K27me3 Prdm14 至少对早期生殖细胞的表观遗传程序很重要[13]。进一P1 表达是被 PRDM14 所维持[14]。PRDM14 也诱导 Dppa3 和 S表达。因此，无论是原始生殖细胞特化基因的表达还是多能基因-null 细胞中均不能发生[15]。而 Tcfap2c，编码 AP2γ(BLIMP1 于 PGC 特化至关重要[12, 16]，因为这一基因的突变导致 PGC 在，BLIMP1、PRDM14 和 AP2γ共同组成了 PGC 特化的相互依
鼠配子发生的体外重构:mESC/iPSC在 ActA和 bFGF的作用下经过两天培养成为包括 BMP4 等细胞因子的刺激下，经过 4-6 天的培养成为 PGCLC。雄性的 PGC分选移植到新生的 W/Wv品系的小鼠睾丸中，完成精子生成过程；雌性 PGCLC 经，和胚体卵巢内的体细胞共培养，形成 重构卵巢 ，然后经过一系列的表观遗传进入减数分裂。长链非编码 RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)乳动物中，基于全基因组水平的转录组测序发现，大约有三分之二的基被转录成 RNA，但是这与最终只有少于 2%的基因组 DNA 翻译成蛋白比。即使蛋白质可以被选择性剪接和翻译后修饰，基因组转录出的非还是要多于编码蛋白的 RNA。这就说明，非编码 RNA 的调控在真核生中起到了非常重要的作用。非编码 RNA（lncRNA）在数量上远少于信使 RNA（mRNA），其长度
本文编号：3510370
【文章来源】：大连医科大学辽宁省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
在体内，PGC来源于胚胎E6.5-7.5天的植入后外胚层细胞，响应来自胚外外胚层(extra-embryonicectoderm,ExE)的BMP和来自胚内内胚层(viscerralendoderm,VE)的BMP2信号
殖细胞与临近的体细胞区分开来。BLIMP1 突变导致 E8.5 天的胞样细胞异常，使他们更像临近的体细胞[11]，通过野生型和 BL始生殖细胞的比较，发现了 Prdm14[12]。Prdm14 突变导致异常原。从 E8.5 天 H3K9me2 的全基因组的擦除来看，这些细胞表现缺失，部分原因是 Ehmt1-Ehmt2 介导的 H3K9 甲基化转移酶活胞也表现出全基因组的 polycomb 酶 EZH2 介导的 H3K27me3 Prdm14 至少对早期生殖细胞的表观遗传程序很重要[13]。进一P1 表达是被 PRDM14 所维持[14]。PRDM14 也诱导 Dppa3 和 S表达。因此，无论是原始生殖细胞特化基因的表达还是多能基因-null 细胞中均不能发生[15]。而 Tcfap2c，编码 AP2γ(BLIMP1 于 PGC 特化至关重要[12, 16]，因为这一基因的突变导致 PGC 在，BLIMP1、PRDM14 和 AP2γ共同组成了 PGC 特化的相互依
鼠配子发生的体外重构:mESC/iPSC在 ActA和 bFGF的作用下经过两天培养成为包括 BMP4 等细胞因子的刺激下，经过 4-6 天的培养成为 PGCLC。雄性的 PGC分选移植到新生的 W/Wv品系的小鼠睾丸中，完成精子生成过程；雌性 PGCLC 经，和胚体卵巢内的体细胞共培养，形成 重构卵巢 ，然后经过一系列的表观遗传进入减数分裂。长链非编码 RNA(Long non-coding RNA, lncRNA)乳动物中，基于全基因组水平的转录组测序发现，大约有三分之二的基被转录成 RNA，但是这与最终只有少于 2%的基因组 DNA 翻译成蛋白比。即使蛋白质可以被选择性剪接和翻译后修饰，基因组转录出的非还是要多于编码蛋白的 RNA。这就说明，非编码 RNA 的调控在真核生中起到了非常重要的作用。非编码 RNA（lncRNA）在数量上远少于信使 RNA（mRNA），其长度
本文编号：3510370
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