基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器检测结核感染的研究

发布时间：2017-05-09 10:18

  本文关键词：基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器检测结核感染的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:1.设计并制备多条结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B,并从中优选出特异性较高的肽段。2.构建新型的超灵敏纳米免疫电化学传感器,探讨其用于结核感染诊断的价值。方法:1.参考文献并利用抗原表位分析软件设计多条结核特异性抗原多肽,收集189例结核病患者外周血单个核细胞(PBMC),分别用结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B刺激PBMC培养72 h,收集细胞培养上清,用ELISA法检测上清中分泌的IFN-γ水平,筛选出能刺激PBMC分泌较多IFN-γ的多肽。2.收集151例结核病患者PBMC,用ELISA法筛选出来的结核特异性抗原多肽ESAT-6、CFP-10和Ag85B单独或以不同组合方式刺激PBMC培养22 h,用ELISPOT法检测斑点形成数,筛选出能刺激PBMC形成较多斑点数的多肽或多肽库。3.在磁珠表面覆盖量子点和二抗,构建以磁珠-量子点-二抗复合物为免疫探针的新型超灵敏纳米免疫电化学传感器,利用前面实验筛选出来的抗原肽刺激结核病患者的PBMC分泌细胞因子IFN-γ,通过夹心免疫法和电化学中的方波溶出伏安法检测IFN-γ水平,判断结核感染。结果:1.设计并合成了10条ESAT-6多肽(编号E1-E10)、10条CFP-10多肽(编号C1-C10)以及9条Ag85B多肽(编号A1-A9)。2.通过ELISA法初步筛选出3条ESAT-6多肽(E3、E6、E9)、3条CFP-10多肽(C1、C6、C8)、3条Ag85B多肽(A2、A5、A9),通过ELISPOT法进一步筛选出不同多肽的优势组合。3.成功构建基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器,该传感器在IFN-γ浓度从0.01pg/m L到10ng/m L范围内,与Cd2+离子溶出峰电流成良好的线性关系(R2=0.966),在实际样品检测结果中与ELISA结果一致,有望用于临床结核感染的诊断。结论:结核特异性抗原多肽E3、E6、E9、C1、C6、C8、A2、A5、A9具有较好的特异性,其不同的组合方式构成的多肽库在刺激结核病患者PBMC分泌IFN-γ的特异性进一步提高,在IFN-γ释放试验中有重要应用价值。新型的基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器具有灵敏度高,稳定性好,响应速度快、价格低廉、操作简便等诸多优势,并且在样品实际检测中具有可行性,该纳米免疫传感系统有望用于临床结核感染的诊断以及其他病原微生物的检测和疾病的诊断。
【关键词】：结核 ESAT-6 CFP-10 Ag85B 量子点 磁珠 方波溶出伏安法
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-22
• 1.1 结核概述10
• 1.2 活动性结核病实验室诊断方法10-13
• 1.2.1 痰涂片和痰细菌培养10-11
• 1.2.2 核酸扩增试验11
• 1.2.3 血清学抗体检测11-12
• 1.2.4 结核菌素皮肤试验12
• 1.2.5 γ-干扰素释放试验12-13
• 1.3 结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10、Ag85B13-14
• 1.4 电化学生物传感器14-15
• 1.5 量子点15-17
• 1.6 纳米磁珠17-19
• 1.7 研究目的和意义19-20
• 1.8 论文创新点20-22
• 第二章 结核特异性抗原肽的筛选22-41
• 2.1 引言22-23
• 2.2 实验材料23-25
• 2.2.1 主要仪器23
• 2.2.2 主要试剂23-24
• 2.2.3 溶液配制24-25
• 2.3 实验方法25-30
• 2.3.1 设计、合成抗原多肽25-26
• 2.3.2 分离外周血单个核细胞26-27
• 2.3.3 ELISA法筛选优势抗原肽27-28
• 2.3.4 ELISPOT法筛选优势抗原肽28-30
• 2.4 实验结果30-37
• 2.4.1 ELISA法筛选优势抗原肽30-34
• 2.4.2 ELISPOT法筛选优势抗原肽34-37
• 2.5 讨论37-40
• 2.6 结论40-41
• 第三章 电化学传感系统检测结核感染的研究41-58
• 3.1 引言41-42
• 3.2 实验材料42-44
• 3.2.1 主要仪器42
• 3.2.2 主要试剂42-43
• 3.2.3 溶液配制43-44
• 3.3 实验方法44-48
• 3.3.1 功能化CdS QDs的制备44
• 3.3.2 磁珠-量子点（MB-QD）复合物的制备44
• 3.3.3 磁珠-量子点-二抗（MB-QD-Ab2）复合物的制备44-45
• 3.3.4 样品处理45
• 3.3.5 酶标板上免疫反应45-46
• 3.3.6 方波溶出伏安法检测条件的优化46
• 3.3.7 方波溶出伏安法检测46-47
• 3.3.8 ELISA法检测样品47-48
• 3.4 实验结果与讨论48-57
• 3.4.1 磁珠与磁珠-量子点复合物的荧光显微镜成像48-49
• 3.4.2 磁珠与磁珠-量子点复合物的扫描电子显微镜（SEM）成像49-50
• 3.4.3 最佳参数的优化选择50-55
• 3.4.4 方波溶出伏安法检测电流响应值55-57
• 3.4.5 临床样本检测57
• 3.5 结论57-58
• 第四章 全文小结58-59
• 参考文献59-65
• 中英文对照缩略词表65-67
• 在学期间发表学术论文及参与科研项目67-68
• 致谢68

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 薛丽京;刘燕;何桥;谭耀驹;;结核分枝杆菌多克隆抗体在结核性病变中的诊断价值[J];临床肺科杂志;2014年01期

2 张艳;;脑脊液检测指标在感染性脑膜炎诊断中的应用[J];临床误诊误治;2015年07期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 邬强;结核分枝杆菌抗原及其融合蛋白在大肠杆菌、烟草中表达和免疫效应研究[D];海南大学;2013年

  本文关键词：基于量子点的超灵敏电化学免疫传感器检测结核感染的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：352327