基于CRISPR/Cas9构建小鼠UOX基因敲除模型

发布时间：2021-12-09 14:35

　　目的通过CRISPR/Cas9获得UOX基因敲除的小鼠纯合品系,为建立高尿酸血小鼠动物模型奠定基础。方法根据小鼠UOX基因第三外显子前后两个位点设计双sgRNA,通过PCR、体外转录和纯化获得sgRNA和Cas9 mRNA。将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射进小鼠原核胚后,体外培养至二细胞胚阶段,进行胚胎移植至代孕母鼠。F0代小鼠出生后,提取其DNA进行电泳分析和测序分析。F0代交配繁殖至F2代获得UOX缺失的小鼠纯合品系。结果显微注射sgRNA和Cas m RNA至原核胚,成功获得50枚囊胚。移植后生育17只幼鼠。其中,有8只小鼠UOX基因缺失突变,突变率为47.06%。成功构建了UOX缺失的小鼠纯合品系。结论利用CRISPR/Cas9,成功获得UOX缺失的小鼠胚胎和纯合品系,为CRISPR/Cas9获得高尿酸血的小鼠动物模型奠定基础。 

【文章来源】：中外医疗. 2020,39(07)

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

sgRNA转录模板琼脂糖凝胶电泳结果

PCR产物测序峰图

【参考文献】：
期刊论文
[1]高尿酸血症和痛风的流行病学及其危险因素的研究进展[J]. 李慧卉.  首都食品与医药. 2019(16)
[2]治疗痛风新型药物研究进展[J]. 曹启江,宋庆凤,姚满,张敏.  广东医学. 2019(10)
[3]糖尿病与痛风发病的竞争风险研究[J]. 董晓梅,张加仪,张思恒,吴雪霁,潘冰莹,庞敏慧,杨建卫,张洁,陈雄飞.  实用预防医学. 2019(04)
[4]痛风与心血管疾病[J]. 赵力,邹和建,薛愉.  中国实用内科杂志. 2018(12)
[5]ZFNs、TALENs和CRISPR-Cas基因组靶向编辑技术及其在植物中的应用[J]. 廖鹏飞,聂旺,余雅心,童普国,李绍波,朱友林.  基因组学与应用生物学. 2016(02)
[6]高尿酸血症和痛风治疗的中国专家共识[J].   中华内分泌代谢杂志. 2013 (11)
[7]人类痛风病与UOX基因沉默相关的研究[J]. 楼秀余.  中外医学研究. 2012(29)



本文编号：3530807