重组人乳头瘤病毒33型L1病毒样颗粒的表达、纯化及免疫原性评价

发布时间：2021-12-17 01:57

　　目的利用毕赤酵母表达人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）33型L1病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）,评价其在小鼠体内的免疫原性。方法构建HPV33 L1表达质粒,电转化毕赤酵母,筛选高表达菌株,15 L发酵罐发酵,离子交换和凝胶体积排阻层析分离纯化HPV33 L1 VLPs,纯化后样品免疫小鼠,采用假病毒中和试验检测小鼠免疫后血清中和抗体滴度。结果质粒HPV33 L1-pPIC3. 5K经双酶切及测序鉴定证明构建成功;毕赤酵母表达产物经Western blot分析,可见相对分子质量约56 000的目的条带;透射电镜下可见直径约60 nm的病毒样颗粒;纯化后的HPV33 L1 VLPs纯度可达95%以上;0. 4和0. 04μg HPV33 L1 VLPs免疫后小鼠血清中和抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）分别为3 200和566,差异有统计学意义（P <0. 05）。结论利用毕赤酵母成功表达了HPV33 L1 VLPs,并具有良好的免疫原性。 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(11)CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株、细胞及质粒
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 质粒的构建
    1.5 电转化毕赤酵母感受态细胞
    1.6 高表达菌株的筛选
    1.7 Western blot分析
    1.8 蛋白的诱导表达
    1.9 蛋白的纯化
    1.1 0 蛋白纯度的检测
    1.1 1 透射电镜观察
    1.1 2 动态光散射分析
    1.1 3 小鼠免疫
    1.1 4 中和抗体滴度的检测
    1.1 5 统计学分析
2 结果
    2.1 质粒HPV33 L1-pPIC3.5K的鉴定
    2.2 HPV33 L1高表达菌株的筛选
    2.3透射电镜观察
    2.4 蛋白纯度
    2.5 动态光散射分析
    2.6 免疫效果评价
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]我国女性人乳头瘤病毒（HPV）感染的流行病学现状[J]. 单玮,张涛,张铁军,赵根明.  中华疾病控制杂志. 2017(01)



本文编号：3539200