幽门螺杆菌毒力蛋白cagA基因敲除突变株构建及鉴定

发布时间：2022-02-11 08:21

　　目的:构建幽门螺杆菌（Hp）毒力蛋白cagA基因敲除突变株并进行鉴定。方法:采用基因打靶技术,从Hp1004基因组扩增cagA基因的上、下游同源重组臂序列,从pACYC184质粒上扩增氯霉素（Cm）序列,通过融合聚合酶链式反应（PCR）技术获得cagA基因敲除打靶片段,克隆入载体pUCmT,得到打靶载体pUCmT-ΔcagA::Cm;再通过电转化法将pUCmT-ΔcagA::Cm质粒直接转入Hp1004,氯霉素抗性平板筛选cagA基因敲除株并命名为Hp/ΔcagA::Cm;采用PCR进行鉴定,并用Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA感染原代胃癌细胞,检测胞内cagA的表达和对细胞形态的影响。结果:融合PCR构建打靶片段长度为1 794 bp,打靶载体转化Hp并筛选后,用cagA外侧引物PCR扩增Hp/ΔcagA::Cm和野生型Hp/cagA,产物长度分别为2 150 bp和5 014 bp;Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA分别感染细胞后,细胞死亡数量多于感染Hp/ΔcagA::Cm突变株,差异有统计学意义（P<001）;野生型Hp/cagA菌株及其感染细胞内cagA蛋... 

【文章来源】：贵州医科大学学报. 2020,45(02)

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA感染细胞形态改变（100×）

cagA基因上、下游同源重组臂经设计与Cm抗性基因序列有部分重叠，可通过PCR直接融合，获得全长的打靶片段，长度为1 794 bp，见图1。2.2 Hp/ΔcagA::Cm突变株PCR鉴定

PCR扩增鉴定结果显示，Hp/ΔcagA::Cm阳性克隆扩增产物为2 150 bp，野生型Hp/cagA菌株扩增产物为5 014 bp，表明成功获得Hp/ΔcagA::Cm敲出突变菌株，见图2。2.3 Hp/ΔcagA::Cm和Hp/cagA感染的原代胃癌细胞形态

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3619933