抗β 2 微球蛋白纳米抗体83F的E.coli制备

发布时间：2022-03-10 14:02

　　β₂微球蛋白（β₂-microglobulin,β₂M）在慢性肾衰竭患者体内不能被正常代谢,过量的β₂M积累会导致淀粉样变,目前血液透析无法去除过量的β₂M。纳米抗体体积小、亲和力高、免疫性强、易于融合表达,在免疫吸附治疗方面有重要的价值。因此,制备大量的抗β₂M纳米抗体具有重要的临床意义,E.coli由于其低廉的培养成本和简单的操作过程,被认为是首选的制备纳米抗体的策略。抗β₂M纳米抗体83F对β₂M亲和力较高,结合特异性较强,但初步研究发现,其主要以包涵体形式存在。为了获得更多有活性的83F,本论文从不同宿主、不同融合标签表达及优化包涵体复性条件等多方面进行了研究。具体研究内容如下:（1）抗β₂M纳米抗体83F的载体构建及表达:通过基因重组技术,将抗β₂M的纳米抗体83F基因序列克隆入pET29a、pET32a、pET39b、pET40b、pET41a及pET28a... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 文献综述
    1.1 β_2微球蛋白与疾病
        1.1.1 β_2微球蛋白的简介
        1.1.2 β_2微球蛋白与相关疾病
        1.1.3 透析相关淀粉样病变的血液净化治疗
        1.1.4 β_2微球蛋白在临床上的应用
    1.2 纳米抗体技术
        1.2.1 纳米抗体的简介
        1.2.2 纳米抗体结构特点及生物化学性质
        1.2.3 纳米抗体的应用
    1.3 融合标签技术
        1.3.1 融合标签技术简介
        1.3.2 融合标签的种类
        1.3.3 融合标签技术的应用
        1.3.4 融合标签技术的移除策略
    1.4 包涵体的复性
        1.4.1 包涵体的概述
        1.4.2 包涵体复性及影响因素
        1.4.3 包涵体复性的常用方法
    1.5 本论文研究目的及意义
2 抗β_2微球蛋白纳米抗体83F的融合表达
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验材料及仪器
        2.2.2 主要仪器及耗材
    2.3 实验方法
        2.3.1 六种纳米抗体重组表达载体的构建
        2.3.2 重组质粒转化表达菌株
        2.3.3 重组蛋白83F的诱导表达
        2.3.4 重组蛋白83F的可溶性检测
        2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
        2.3.6 金属离子螯合层析
        2.3.7 纳米抗体83F蛋白纯度的分析及回收率的计算
        2.3.8 ELISA法检测抗β_2M纳米抗体83F的抗原结合活性
        2.3.9 SPR测定抗β_2M纳米抗体83F的亲和力
        2.3.10 抗β_2M纳米抗体83F融合标签的切除
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 纳米抗体83F融合表达载体的构建
        2.4.2 纳米抗体83F的表达
        2.4.3 纳米抗体83F的纯化及纯度分析
        2.4.4 纳米抗体83F的活性检测
        2.4.5 纳米抗体83F融合标签的切除
        2.4.6 SPR检测切除标签后纳米抗体83F的亲和力
    2.5 本章小结
3 抗β_2微球蛋白纳米抗体83F的包涵体复性
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 材料及试剂
        3.2.2 主要仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 包涵体的收集、初步纯化及变性
        3.3.2 金属离子螯合层析
        3.3.3 重组蛋白的稀释复性及优化
        3.3.4 蛋白纯度的分析及蛋白回收率的计算
        3.3.5 复性后蛋白抗原结合活性的ELISA检测
        3.3.6 SPR测定抗β_2M纳米抗体的亲和力
        3.3.7 圆二色测定抗β_2M纳米抗体的二级结构
    3.4 实验结果与讨论
        3.4.1 纳米抗体83F包涵体的纯化
        3.4.2 纳米抗体83F包涵体复性条件优化
        3.4.3 SPR测定复性后纳米抗体83F的亲和力
    3.5 本章小结
结论
展望
参考文献
附录A 抗β_2M纳米抗体基因序列信息
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]高通量血液透析治疗终末期肾病的临床观察[J]. 陆雅良.  基层医学论坛. 2018(07)
[2]重组大肠杆菌硫氧还蛋白（Trx）的制备及功能分析[J]. 孙风梅.  智库时代. 2018(01)
[3]血、尿β2微球蛋白在诊断糖尿病肾病患者早期肾损伤中的价值分析[J]. 陈树华.  中国医学创新. 2017(15)
[4]国产血液滤过器对血液透析滤过治疗血清β2微球蛋白的清除效果[J]. 李晓庆,卢方平.  中国血液净化. 2017(04)
[5]优化大肠杆菌表达外源蛋白的研究进展[J]. 苏鹏,龚国利.  生物技术通报. 2017(02)
[6]纳米抗体技术及其在疾病诊断和治疗中的应用[J]. 周陶然,詹守斌,翟飞,汪洋,易军.  生物化学与生物物理进展. 2016(10)
[7]纳米抗体及其在诊断检测中的研究进展[J]. 孔庆明,姚亚波,陈睿,陆绍红.  生物工程学报. 2014(09)
[8]融合标签在蛋白质可溶性表达中的应用进展[J]. 吴珊珊,朱芸,陈珊珊,何冰芳.  化工进展. 2014(04)
[9]重链抗体的结构特点及其应用前景分析[J]. 蔡家麟,夏立亮,潘欣,王颖.  生命科学. 2013(09)
[10]纳米抗体用于肿瘤诊断与治疗的研究进展[J]. 刘静,胡耀中,黄鹤.  化学工业与工程. 2013(04)

博士论文
[1]变性蛋白复性装置研制及包涵体蛋白变性和复性技术研究[D]. 冯延叶.华东理工大学 2013

硕士论文
[1]重组大肠杆菌表达包涵体药物蛋白的复性与纯化研究[D]. 何伟.华东理工大学 2017
[2]抗EGFR纳米抗体的制备及其活性研究[D]. 宋晓钰.大连理工大学 2015
[3]蓝细菌融合标签技术分离纯化蛋白质方法的建立与优化[D]. 晋虎.天津大学 2014



本文编号：3645775