斑马鱼Mil/s1pr2和vmhc基因的功能研究及药源性心脏毒性模型的建立

发布时间：2022-08-09 18:06

　　心血管疾病是威胁人类健康的最常见疾病,且造成巨大的经济损失。治疗心血管疾病的新药研发一直是药学领域的研发重点。然而与之相配套的药物毒性的早期筛查和预测的新模型和技术系统,仍相对落后。一种具有心脏风险的新药的上市和撤市,除造成人员生命财产的损失外,还导致药物研发领域人力、物力和时间的巨大浪费。因而,建立一个灵敏、准确、高通量、可早期介入的药物心脏安全性的体内评价系统,尤为重要和必要。斑马鱼是一种脊椎类的小型模式动物,繁殖力强,体外受精和发育,其生长发育过程、组织系统结构与人类有很高的相似性,在基因和蛋白质的结构和功能上也具有很高的保守性。目前已经具有成熟的斑马鱼细胞标记技术、突变技术、基因活性移植技术和显微注射技术等各种分子生物学技术。因此斑马鱼成为研究人类疾病的发生发展机制、预防和治疗,以及新药研发的优良模式动物。尤其是斑马鱼的心脏结构清晰,易于观察；虽然其心脏为两腔心脏——一房一室,但其发生和发育路线及相关基因调控机制与人类接近,在胚胎和幼体阶段心脏位于体表,非常适于进行心脏疾病模型和心脏毒理的研究。因此,本研究选用斑马鱼为模式动物建立药物心脏毒性的检测模型。本论文的主要成果如下：1... 

【文章页数】：139 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
论文缩写词中英文对照
第一部分 斑马鱼Mil/slpr2和vmhc基因的功能研究
    前言
    技术路线
    第一章 斑马鱼Mil/slpr2基因的功能研究
        材料与方法
            1. 实验材料
            2. 实验方法
        实验结果
            3.1 启动子的克隆及序列分析
            3.2 mil启动子序列的缺失实验及功能分析
            3.3 野生型斑马鱼中mil基因的表达pattern
            3.4 mil基因功能研究
            3.5 斑马鱼胚胎mil基因knockdown和过表达的表达分布图示
            3.6 mil knockdown后对心脏marker基因表达的影响
            3.7 mil基因下调或上调后后对神经marker基因表达的影响
            3.8 mil基因knockdown或过表达对听力相关基因表达的影响
            3.9 mil基因knockdown使斑马鱼幼体神经丘和毛细胞生成减少
            3.10 mil基因过表达使斑马鱼幼体侧线神经丘和毛细胞过度增生
        讨论
            4.1 mil基因在心血管系统发育中的作用
            4.2 mil基因在神经系统的发育中具有重要的作用
            4.3 mil基因对内耳的发育具有至关重要的作用
            4.4     mil基因可能存在双重启动子的调控
    第二章 Vmhc基因启动序列指导的GFP转基因鱼的研究
        实验材料与方法
        实验结果
            2.1 vmhc启动子序列的克隆分析及表达载体的构建
            2.2 Pvmhc-EGFP基因构件在斑马鱼心脏特异表达
            2.3 EGFP对心率的影响
            2.4 Pvmhc-EGFP基因表达构件转基因鱼的传代分析
        讨论
            4.1 心脏标记GFP的转基因斑马鱼的制备
            4.2 心脏标记GFP的转基因斑马鱼模型的优势
    参考文献 (第一、二章)
第二部分 药物心脏毒性的斑马鱼评价模型
    前言
    技术路线
    材料方法
        1. 实验材料
        2. 实验方法
    实验结果
        3.1 野生型斑马鱼的心律
        3.2 幼体阶段给药terfenadine心脏异常模型
        3.3 幼体阶段给药维拉帕米(verapamil)心脏异常模型
        3.4 幼体阶段给药moxifloxacin后心脏异常模型
        3.5 胚胎阶段给药维生素A(Va)异常模型
    讨论
        4.1 野生型斑马鱼心律标准的建立
        4.2 Terfenadine可导致斑马鱼幼鱼心脏淤血并心律失常
        4.3 Terfenadine的急性毒性使斑马鱼胚胎心脏marker基因表达发生变化
        4.5 Verapamil引起斑马鱼胚胎心律失常
        4.6 Moxifloxacin诱使斑马鱼幼体发生严重心律失常
        4.7 外源性va诱导斑马鱼心脏发育畸形
        4.8 叶酸在一定程度上可以挽救胚胎发育的畸形形态
    参考文献
论文结论
综述
    第一部分 人类心脏病概况和疾病模型研究
        1. 人类心脏病概述
        2. 人类心脏病疾病模型研究
    第二部分 诱发心脏疾病的药物
    参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]斑马鱼红系造血缺陷突变体的正向遗传学筛选[J]. 霍中军,温宗华,刘靖,王鹍,黄志斌,戴朝霞,马宁,颜广,陈英华,陈小辉,刘伟,马品芸,罗伟豪,赵颖,樊淑,赵嘉佳,黄红辉,温子龙,张文清.  南方医科大学学报. 2010(05)
[2]Inactivation gating determines drug potency:a common mechanism for drug blockade of HERG channels[J]. Bao-feng YANG1, Dong-hui XU2, Chao-qian XU, Zhe LI, Zhi-min DU, Hui-zhen WANG, De-li DONGDepartment of Pharmacology, Harbin Medical University, Harbin 150086, China;2Department of Pharmacy, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2004(05)



本文编号：3673032