沙眼衣原体pORF5质粒蛋白激活PI3K/AKT通路上调HO-1抑制细胞凋亡

发布时间：2022-10-09 19:52

　　目的:沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）属于专性胞内寄生的原核细胞型生物,通过抑制宿主细胞凋亡以完成其发育周期,但其抑制细胞凋亡的分子机制尚未完全阐明。pORF5蛋白是由Ct质粒编码的一种分泌性蛋白,能激活PI3K/AKT通路抑制细胞凋亡,本研究试图探讨pORF5质粒蛋白与PI3K/AKT信号通路、HO-1的关系,以及HO-1是否在pORF5蛋白抗细胞凋亡中发挥作用,为阐明Ct致病机制提供实验依据。方法:1.应用LB固体培养基,37℃培养含p GEX-6p/pORF5重组质粒的XL1-blue大肠杆菌24~36h,挑选单克隆菌落接种到LB液体培养基中,置于200rpm、37℃水浴摇床,振荡过夜扩大培养,用终浓度为0.2m M的IPTG诱导GST-pORF5融合蛋白表达4h;通过谷胱甘肽-琼脂糖凝胶纯化GST融合蛋白,Pre Scission Protease切除融合蛋白GST标签,制备pORF5质粒蛋白;用BCA法测定pORF5蛋白浓度,western blotting鉴定pORF5质粒蛋白。2.pORF5蛋白以不同浓度（0、3、6、9、12μg/ml）、不... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
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主要中英文缩写
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要实验仪器
    2.2 载体、菌株及细胞株
    2.3 主要试剂盒
    2.4 主要实验试剂
    2.5 其他
第3章 实验方法
    3.1 纯化与鉴定pORF5质粒蛋白
    3.2 pORF5质粒蛋白对HO-1蛋白表达的影响
    3.3 PI3K/AKT通路对pORF5质粒蛋白上调HO-1表达的影响
    3.4 pORF5质粒蛋白通过上调HO-1抑制细胞凋亡
    3.5 数据处理与统计学分析
第4章 实验结果
    4.1 pORF5融合蛋白的表达、纯化与鉴定
    4.2 pORF5蛋白诱导HeLa细胞HO-1表达上调
    4.3 质粒蛋白pORF5通过PI3K/AKT上调HO-1
    4.4 HO-1对pORF5凋亡抑制作用的影响
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
文献综述 活性氧介导的信号通路在衣原体感染过程中的作用机制研究进展
    1 ROS的生成与衣原体感染
    2 活性氧介导的信号通路及其对衣原体感染细胞的影响
    3 展望
    参考文献
作者攻读学位期间的科研成果
    一、发表的论文
    二、参与课题
本研究受以下课题资助
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞凋亡途径及其机制[J]. 李敏,林俊.  国际妇产科学杂志. 2014(02)



本文编号：3689256