发色底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原纯化工艺的可行性分析

发布时间：2022-11-06 16:30

　　目的分析发光底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原（plasminogen,Pg）纯化工艺的可行性。方法采用纤溶酶原测定试剂盒对ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能进行确认;并对该方法的线性范围、准确度、精密度、选择性进行验证;应用Softmax及Statistic软件分析定标血浆及Pg纯化样品检测结果的平行性;采用验证的方法检测Pg全层析工艺样品的效价及目标样品存贮稳定性。结果 ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能稳定。定标血浆标准曲线线性范围为0. 128～1. 28 U/mL,稀释样品回收率在92%～103%之间,R~2≥0. 99;定标血浆的高、中、低值、检测下限及正常质控血浆（control plasma normal,CPN）效价回收率批内及批间分别在91%～108%和94%～107%之间,批内及批间CV分别在0. 5%～1. 9%和0. 3%～1. 4%之间;Pg纯化各段层析缓冲液所含特殊组分除1%Tween80+0. 3%磷酸三丁酯外对Pg效价检测无影响。纯化样品Pg效价检测曲线与定标血浆曲线平行。全层析工艺Pg半成品的比活性达8 U/mg以上,效价总回收率达50%以上... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 样品
    1.2主要试剂及仪器
    1.3 试剂复溶及配制
    1.4 ACL7000血凝仪操作程序
    1.5 ACL7000血凝仪运行发色底物法性能确认
    1.6 方法学验证
        1.6.1 线性范围
        1.6.2准确度
        1.6.3 精密度
        1.6.4 选择性
    1.7 检测数据平行线分析
        1.7.1 ACL7000血凝仪检测
        1.7.2 采用不同软件进行实验数据分析
        1.7.3不同拟合曲线获得效价的比较
    1.8 方法的应用
        1.8.1 纯化工艺过程的监控
        1.8.2 液体样品的稳定性
2 结果
    2.1 ACL7000血凝仪运行程序性能确认
    2.2 方法学验证
        2.2.1 线性范围
        2.2.2 准确度
        2.2.3 精密度
        2.2.4 选择性
    2.3 Pg纯化样品与定标血浆的Pg效价检测结果的平行性分析
        2.3.1 softmax分析
        2.3.2 Statistic分析
        2.3.3 不同拟合方式获得的样品效价
    2.4 方法的应用
        2.4.1 纯化工艺中Pg效价
        2.4.2 Pg样品稳定性
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]Lys-纤溶酶原的制备及其活力稳定性[J]. 陈维金,孙宏,关锋,张洪超,陈立新,赵立哲,曲爱军,左泉,李武平,刘淑英,梁放,刘兰英.  中国生物制品学杂志. 2000(04)



本文编号：3703836