靶向自噬促进/结核分枝杆菌持留期抗原双相治疗性DNA疫苗构建

发布时间：2022-12-10 10:58

　　研究目的： 构建靶向自噬促进／结核分枝杆菌持留期抗原双相治疗性DNA疫苗,使之能在MΦ中特异性表达IRGM1蛋白以及编码结核分枝杆菌持留期抗原,为后续在分子、细胞以及动物水平研究其抗结核感染的效果和机制奠定基础,以期克服结核病潜伏感染、多重耐药和再燃等治疗难题。 研究方法： 1.利用PCR方法扩增IRGM1、Rv1733c、Rv2031c、Rv2626c基因,再分别克隆至质粒载体pET-32a（+）中。扩增MΦ特异性启动子序列SP107替换掉双启动子真核共表达质粒pBudCE4.1的启动子CMV,将其改造成pBudSP。所有重组质粒经酶切鉴定正确后,送测序。测序正确后,依照次序,先将IRGM1基因片段亚克隆入pBudSP中SP107启动子下游的Sal Ⅰ/BamH I位点中形成pBudSP-L,再将Rv1733c/Rv2031c/Rv2626c基因分别亚克隆入pBudSP-L中EF-1α[启动子下游的Not Ⅰ/Kpn I位点中,形成MΦ特异性真核双表达质粒pBudSP-L-1733c/2031c/2626co 2.利用PCR方法,以质粒pERLO为模版扩增RF... 

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
符号说明
第1章 引言
第2章 治疗性DNA疫苗pBudSP-L-1733c/2031c/2626c的构建及鉴定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 结果
        2.2.1 质粒pBudSP的构建及鉴定
        2.2.2 质粒pET32a(+)-IRGM1和pET32a(+)-1733c/2031c/2626c的构建及鉴定
        2.2.3 质粒pBudSP-L-1733c/2031c/2626c的构建及鉴定
    2.3 讨论
    2.4 小结
第3章 荧光蛋白融合表达载体的构建及鉴定
    3.1 材料和方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 结果
        3.2.1 质粒pCDNA3.1(+)-RFP的构建及鉴定
        3.2.2 质粒pET32a(+)-IRGM1②的构建及鉴定
        3.2.3 质粒pBudSP-LR-1733c/2031c/2626c的构建及表达鉴定
        3.2.4 FuGENE HD转染后荧光观察
        3.2.5 pCDNA3.1(-)-1733②的构建及鉴定
        3.2.6 pET32a(+)-GFP的构建及鉴定
        3.2.7 pBudSP-LR-1733G的构建及鉴定
        3.2.8 电转染后荧光观察
        3.2.9 RQ-PCR检测目的基因RNA水平表达
        3.2.10 质粒pBudCE-RFP的构建及鉴定
        3.2.11 启动子SP107的特异性检测
    3.3 讨论
    3.4 小结
第4章 结论
    4.1 概述
    4.2 主要研究结论
    4.3 本课题的创新之处
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用[J]. 王景,穆媛媛,黎庶,陈志瑾,熊坤,丛延广.  第三军医大学学报. 2009(23)



本文编号：3716628