TLR4/miR-181b信号轴对TGF-β介导的上皮—间质转化的调控作用及机制研究

发布时间：2022-12-18 08:34

　　转化生长因子β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）通路是介导上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）发生的最重要信号通路之一,广泛参与了胚胎发育、肿瘤转移和纤维化等生理或病理过程。Toll样受体4（Toll like receptor 4,TLR4）是最早发现的TLRs家族成员,除了对机体天然和获得性免疫反应起到调控作用外,在肿瘤转移和纤维化过程中也发挥了重要作用。然而,TLR4信号通路对TGF-β介导的EMT是否具有调控作用及可能的分子机制尚未完全明确。在本研究中,TGF-β1可下调人呼吸道上皮细胞系A549细胞中上皮标志物E-cadherin的表达,上调间质标志物N-cadherin、Vimentin的表达,且诱导细胞向间质细胞形态转变。而给予TLR4激动剂LPS刺激后,TGF-β1诱导A549细胞EMT的作用明显减弱,提示TLR4激活可抑制TGF-β1介导的EMT。通过深度测序和q RT-PCR检测发现,LPS刺激可显著上调A549细胞中mi R-181b的表达。染色质免疫沉淀（Chroma... 

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 综述
    2.1 miRNA简介
        2.1.1 miRNA的发现
        2.1.2 miRNA的生物学特性
        2.1.3 miRNA的生物合成及作用机制
    2.2 miRNA在IPF中的表达调控
        2.2.1 let-7d与IPF
        2.2.2 miR-21与IPF
        2.2.3 miR-200与IPF
        2.2.4 miR-155与IPF
        2.2.5 miR-29与IPF
    2.3 miRNA与IPF的治疗
第3章 资料和方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 主要实验器材（见表 3.1）
        3.1.2 主要试剂（见表 3.2）
        3.1.3 细胞系
    3.2 实验方案
        3.2.1 研究LPS刺激对TGFβ1 诱导的EMT的影响
        3.2.2 与TLR4激活相关的miRNAs表达谱
        3.2.3 预测并明确TLR4上调miR-181b的转录因子
        3.2.4 过表达miR-181b对上皮-间质转化（EMT）的影响
        3.2.5 预测并明确miR-181b的作用靶点
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养及传代
        3.3.2 荧光报告基因检测（luciferase assay）
        3.3.3 染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） 实验
        3.3.4 miR-181b转染A549细胞
        3.3.5 Trizol法提取总RNA及RNA完整性检测
        3.3.6 qRT-PCR检测miRNA和mRNA表达
        3.3.7 Western Blotting检测
        3.3.8 细胞免疫荧光染色
        3.3.9 统计学分析
第4章 结果
    4.1 LPS刺激可以减轻TGFβ 1诱导的A549细胞的EMT
    4.2 LPS刺激激活TLR4后引起A549细胞内miRNAs变化
    4.3 qRT-PCR验证TLR4激活后miR-181b表达上调
    4.4 AP1为TLR4上调miR-181b的转录因子
    4.5 过表达miR-181b可以减轻TGF-β 诱导的EMT
    4.6 TGFBR1是miR-181b的下游作用靶点
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3721736