一种简单经济提取小鼠大量肾小球的实验方法

发布时间：2023-01-08 19:44

　　目的为减轻实验者用磁珠提取肾小球的经济负担,对传统的心脏灌注肾脏提取方法进行改良。方法结扎远端腹主动脉及下腔静脉,结扎肠系膜上动脉和腹腔动脉,以减少磁珠分流。将磁珠工作液经静脉留置针灌注肾脏。加入相应体积胶原酶A,通过100?μm筛网2次,加入蛋白裂解液,离心裂解吸出含蛋白上清进行肾小球蛋白的纯化、定量。结果与传统的心脏灌注肾脏提取方法比较,改良胸主动脉灌注肾脏提取肾小球方法磁珠用量仅为原来的1/35～1/40。在获取相同的蛋白情况下,提取肾小球的最佳浓度为4×10~6磁珠/ml,磁珠用量为20?ml。通过该方法灌注分离的肾小球完整,纯度为（95.7±2.3）%。结论改良的胸主动脉灌注肾脏是一种简单经济实用磁珠提取肾小球的实验方法,可以快速获取大量完整的肾小球,蛋白质甚至RNA,为肾小球本身的研究提供新的技术支持。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2 实验方法
        1.2.1 经胸主动脉行肾脏磁珠灌流术
        1.2.2 摘取肾脏和磁珠收集肾小球
        1.2.3 去除磁珠
        1.2.4 肾小球蛋白的纯化和浓度的定量
        1.2.5 肾小球分离效果的观察
        1.2.6 检测不同浓度磁珠提取的肾小球蛋白浓度
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 肾小球分离效果
        2.1.1 万能显微镜下的观察结果
        2.1.2 HE染色显示的肾小球的分离结果
        2.1.3 扫描电镜显示的肾小球的分离结果
    2.2 不同浓度磁珠浓度提取小鼠肾小球蛋白浓度比较
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]湖南省慢性肾脏病流行病学调查[J]. 李燕,杨海蓉,贺艳,刘宏敏,谌平,王湘川.  湖南师范大学学报(医学版). 2018(03)
[2]中国成人及老年人群慢性肾脏病患病率Meta分析[J]. 王善志,朱永俊,唐文庄,刘楠,叶凤,李国铨,王敏,王华南,郑颜萍,梁海琴,钟良宝.  中国老年学杂志. 2017(21)



本文编号：3729058