人肠道病毒71型及柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白的真核表达

发布时间：2023-02-26 16:13

　　目的:克隆人肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇病毒A组16型(CA16)的VP1蛋白编码基因,构建相应真核表达质粒在体外进行重组表达,检测其细胞内定位,为EV71及CA16的疫苗研究提供基础。方法:通过PCR扩增分别获取EV71及CA16的VP1编码序列,插入pcFlag载体,分别构建EV71及CA16 VP1与FLAG标签融合的真核表达质粒;瞬时转染人胚肾293T细胞及横纹肌肉瘤RD细胞,Western blot法检测融合蛋白的表达,免疫荧光检测融合蛋白的细胞内定位情况。结果:测序表明两种来源VP1蛋白的重组表达质粒构建正确;分别转染两种不同的细胞后,均可通过Western blot检测到相应蛋白表达;免疫荧光检测显示两种毒株的VP1均表达在细胞质中。结论:外源融合表达EV71或CA16 VP1蛋白的真核表达质粒构建成功;所构建质粒分别转染细胞后,均可在细胞质内检测到VP1融合蛋白的表达。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 病毒RNA提取与逆转录
    1.3 目的片段获取
    1.4 重组载体构建与鉴定
    1.5 细胞培养与转染
    1.6 Western blot检测外源蛋白表达
    1.7 免疫荧光检测外源蛋白细胞内定位
2 结果
    2.1 CA16和EV71毒株VP1片段的扩增
    2.2 CA16和EV71毒株VP1片段及真核表达载体pcFlag的酶切回收与连接
    2.3 含有CA16和EV71毒株VP1的真核表达质粒构建和鉴定
    2.4 VP1蛋白在细胞中的外源重组表达
    2.5 重组VP1蛋白在细胞内的定位
3 讨论



本文编号：3750530