N,N'-二环己基-N-亚麻酸酰脲抑制淋巴细胞的增殖作用及机制

发布时间：2024-07-06 12:41

　　目的:器官移植是临床治疗器官衰竭的唯一有效手段[1],而免疫排斥问题是器官移植面临的主要障碍。目前器官移植术后抗排斥药物在免疫抑制效果以及毒副作用方面不够理想,亟需开发新型的免疫抑制剂。本实验室前期从板蓝根中提取若干单体,筛选出具有免疫抑制活性的单体成分,并通过药效学实验进行了验证。在此基础上,为了克服这些有效成分溶解性较差的问题,我们经过结构修饰得到新的化合物MSR405。本研究中,我们将通过一系列的体外实验研究MSR405的抑制作用及其可能的作用机制方法:首先,我们通过淋巴细胞转化实验、无能实验、凋亡实验等体外实验研究MSR405对淋巴细胞抑制增殖作用和机制。然后,采用高通量测序技术对MSR405抑制淋巴细胞增殖的作用机制进行研究。最后,在测序结果的基础上使用qRT-PCR和WB验证MSR405可能作用的通路,并进一步探索作用机制。结果:首先,MSR405以剂量依赖性的方式抑制淋巴细胞的增殖。其次,RNA-seq的结果表明MSR405抑制淋巴细胞增殖的能力与细胞周期有显著相关性,并且流式细胞术结果表明,MSR405用药组的淋巴细胞的G1期比例增加,S期比例减少,G2/M期的比例无明...

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【学位级别】：硕士

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第一章 前言
    1.1 器官移植概况
    1.2 器官移植排斥反应类型及其机制概述
        1.2.1 超急性排斥反应
        1.2.2 急性排斥反应
        1.2.3 慢性排斥反应
    1.3 淋巴细胞与器官排斥反应
        1.3.1 同种异体识别途径
        1.3.2 T细胞的激活
    1.4 免疫抑制剂发展与应用
        1.4.1 皮质激素类免疫抑制剂
        1.4.2 抗代谢类抑制剂
        1.4.3 钙调磷酸酶抑制剂类
        1.4.4 雷帕霉素靶蛋白抑制剂
        1.4.5 生物学免疫抑制剂
        1.4.6 中药类免疫抑制剂
    1.5 N,N'-二环己基-N-亚麻酸酰脲(MSR405)与细胞周期信号通路
        1.5.1 N,N'-二环己基-N-亚麻酸酰脲
        1.5.2 细胞周期与细胞周期调控
        1.5.3 TGF-β/Smad信号通路
        1.5.4 PI3K-Akt信号通路
    1.6 本研究的目的、意义和内容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 研究意义
        1.6.3 研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 主要耗材
    2.2 研究方法
        2.2.1 细胞免疫学实验与方法
        2.2.2 分子生物学实验与方法
        2.2.3 转录组测序(RNA-seq)
        2.2.4 统计学分析
第三章 结果与讨论
    3.1 MSR405对小鼠淋巴细胞的作用
        3.1.1 MSR405对小鼠淋巴细胞增殖的影响
        3.1.2 MSR405对混合淋巴细胞培养实验的影响
        3.1.3 MSR405对移植免疫相关基因表达的影响
        3.1.4 MSR405对淋巴细胞分泌细胞因子IL-4和IFN-γ的影响
    3.2 MSR405对小鼠淋巴细胞抑制增殖可能机制的探索
        3.2.1 MSR405对淋巴细胞的克隆无能的影响
        3.2.2 MSR405对淋巴细胞凋亡的影响
    3.3 转录组测序(RNA-seq)研究MSR405对淋巴细胞的作用机制
        3.3.1 差异表达分析
        3.3.2 差异基因表达富集分析
    3.4 细胞周期阻滞参与MSR405抑制淋巴细胞增殖的机制
        3.4.1 MSR405对P15、TGF-β、Cyclin E的表达的影响
        3.4.2 MSR405对淋巴细胞周期的影响
        3.4.3 MSR405对淋巴细胞周期G1/S期的影响
        3.4.4 MSR405和TGF-β抑制剂协同抑制淋巴细胞增殖
        3.4.5 MSR405对Pdk1/Akt通路的影响
    3.5 讨论
第四章 结论与展望
参考文献
附录
致谢



本文编号：4002566