人源间充质干细胞质量鉴定体系初步构建

发布时间：2023-04-18 18:30

　　间充质干细胞是一类来源广泛的多能干细胞,随着其在组织工程和再生医学中广泛应用,对于在规模化制备、低温储存过程中建立严格的质量鉴定检测体系,确保培养的细胞群体的安全性和达到预期用途也提出越来越高的要求,而国内外对于MSCs培养过程尚未有统一的质量鉴定检测标准体系。本课题基于深圳国家基因库细胞资源库的建设,研究建立四种来源间充质干细胞(UC-MSCs、PD-MSCs、DP-MSCs、A-MSCs)质量控制工艺,通过采集健康足月新生儿废弃脐带、胎盘组织、7-10岁儿童乳牙、20-30年龄段腹部抽脂弃用脂肪组织,采用组织块贴壁法(UC-MSCs)、酶消化法(PD-MSCs、DP-MSCs、A-MSCs)进行体外细胞分离并扩增至P2代冻存;制备过程中进行细胞形态、细胞数量及活力测定其生长状态;供者进行传染病筛查来源安全性;在原代培养、传代培养、细胞冻存进行支原体、需厌氧及真菌、细菌内毒素检测培养过程安全性;流式细胞术检测细胞纯度;STR抽样检测细胞间无交叉污染;向成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞分化抽样检测其分化倾向性,同时通过RT-PCR检测成骨RUNX2、OCN基因、成软骨SOX9、COL2...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 研究背景
    1.1 间充质干细胞及其主要特征
        1.1.1 间充质干细胞的定义
        1.1.2 间充质干细胞来源
        1.1.3 间充质干细胞特征
    1.2 间充质干细胞国内外研究现状
        1.2.1 间充质干细胞的应用
        1.2.2 间充质干细胞国内外临床研究进展
    1.3 间充质干细胞质量控制研究现状及其存在的问题
    1.4 本研究的意义与内容
        1.4.1 本研究的意义
        1.4.2 研究的内容
        1.4.3 研究路线
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 样本材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要设备
    2.2 实验步骤与方法
        2.2.1 试剂配制
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 细胞冻存
        2.2.4 质量检测
第三章 结果与分析
    3.1 供体筛查
        3.1.1 人源特定病毒检测
    3.2 原代组织分离、细胞培养结果分析
        3.2.1 支原体检测
        3.2.2 需、厌氧及真菌检测
    3.3 细胞冻存结果分析
        3.3.1 细胞活力
        3.3.2 细胞形态
        3.3.3 需、厌氧及真菌检测
        3.3.4 支原体检测
        3.3.5 细菌内毒素检测
        3.3.6 间充质干细胞表面抗原结果
    3.4 间充质干细胞STR图谱结果分析
    3.5 四种来源间充质干细胞分化倾向性分析
        3.5.1 成骨分化结果分析
        3.5.2 成软骨分化结果分析
        3.5.3 成脂肪分化结果分析
    3.6 环境控制结果分析
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 论文的主要创新点
    4.3 展望
参考文献
攻读硕士期间的研究成果
致谢
附件



本文编号：3792791