促抗原溶酶体逃逸的肿瘤纳米疫苗的研究

发布时间：2023-04-18 22:11

　　目的:通过激活自身免疫系统识别并清除肿瘤细胞的肿瘤免疫疗法成为近年来临床上治疗恶性肿瘤的一项新策略。随着纳米科技的发展,纳米颗粒介导的疫苗即纳米疫苗已成为越来越重要的一个研究领域。纳米颗粒除了可以保护所载抗原免受体液中各种酶的降解及作为抗原储存池的作用外,还可以通过靶向修饰将抗原精准地输送至免疫细胞。近几年来,研究证实通过时空控制编排,借助纳米颗粒还可以改变抗原在免疫细胞内的递呈通路,诱导产生特定的免疫反应,如促进纳米疫苗负载的抗原从溶酶体逃逸至胞浆后通过MHC-Ⅰ途径提呈即交叉呈递,激活抗原特异的细胞毒性T细胞免疫反应。本研究分别将具有跨膜作用的细胞穿透肽MPG△NLS和具有干扰溶酶体膜稳定性作用的羟基氯喹HCQ引入纳米疫苗中,以增强抗原从溶酶体逃逸至胞浆中通过交叉呈递,诱导机体产生抗原特异的细胞免疫反应,尤其是细胞毒性T淋巴细胞反应。方法:MPG△NLS介导的纳米疫苗是首先将细胞穿膜肽MPG△NLS与模型抗原OVA以二硫键共价连接,然后采用两步乳化法将其包裹在PLGA纳米颗粒中制备而成(MPG△NLS-OVA-PLGANPs);HCQ介导的纳米疫苗是采用PLGA直接包裹HCQ与OV...

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
    1. 肿瘤免疫治疗
    2. 肿瘤疫苗
    3. 纳米疫苗载体
    4. 溶酶体逃逸与抗原交叉提呈
    5. 课题的提出
    参考文献
第一部分 MPG^△NLS-OVA-PLGA肿瘤纳米疫苗的研究
    前言
        参考文献
    第1章 MPG^△NLS-OVA的合成与表征
        1.1 本章引论
        1.2 实验材料
            1.2.1 主要试剂
            1.2.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 MPG^△NLS-OVA的合成方法
            1.3.2 MPG^△NLS-OVA的共价连接验证
        1.4 实验结果
            1.4.1 MPG^△NLS-OVA的合成路线
            1.4.2 荧光光谱
        1.5 讨论与小结
        参考文献
    第2章 MPG^△NLS-OVA-PLGA纳米疫苗的制备与表征
        2.1 本章引论
        2.2 实验材料
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的制备方法
            2.3.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的表征
            2.3.3 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的蛋白包封率检测
            2.3.4 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的蛋白释放情况
        2.4 实验结果
            2.4.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs扫描电镜图像
            2.4.2 纳米粒的粒径与Zeta电位
            2.4.3 纳米粒的蛋白包封率
            2.3.4 纳米粒的体外蛋白累积释放率
        2.5 讨论与小结
        参考文献
    第3章 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的体外免疫效应研究
        3.1 本章引论
        3.2 实验材料
            3.2.1 主要试剂
            3.2.2 主要仪器
        3.3 实验方法
            3.3.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的体外摄取
            3.3.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs对抗原提呈细胞成熟的刺激作用研究
        3.4 实验结果
            3.4.1 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs的体外摄取情况
            3.4.2 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs对抗原提呈细胞成熟的刺激作用
        3.5 讨论与小结
        参考文献
    第4章 MPG^△NLS-OVA-PLGA NPs纳米疫苗的体内免疫评价
        4.1 本章引论
        4.2 实验材料
            4.2.1 主要试剂
            4.2.2 主要仪器
        4.3 实验方法
            4.3.1 小鼠体内免疫流程
            4.3.2 小鼠血清IgG含量ELISA分析
            4.3.3 细胞内IFN-γ染色
            4.3.4 流式细胞术评价免疫小鼠的T细胞应答
            4.3.5 肿瘤模型小鼠肿瘤体积与生存期
        4.4 实验结果
            4.4.1 免疫小鼠血清抗体含量的ELISA分析
            4.4.2 免疫小鼠细胞内IFN-γ含量检测
            4.4.3 纳米疫苗免疫正常小鼠后的T细胞免疫应答
            4.4.4 肿瘤模型小鼠的肿瘤体积与生存期
        4.5 讨论与小结
        参考文献
    第一部分 小结
第二部分 羟基氯喹介导的肿瘤纳米疫苗的研究
    前言
        参考文献
    第1章 HCQ-OVA-PLGA NPs的制备与表征
        1.1 本章引论
        1.2 实验材料
            1.2.1 主要试剂
            1.2.2 主要仪器
        1.3 实验方法
            1.3.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的制备方法
            1.3.2 HCQ-OVA-PLGA NPs的表征
            1.3.3 HCQ-OVA-PLGA NPs的蛋白包封率检测
            1.3.4 HCQ-OVA-PLGA NPs的蛋白释放情况
        1.4 实验结果
            1.4.1 纳米粒的透射电镜图像
            1.4.2 纳米粒的粒径与Zeta电位
            1.4.3 纳米粒的蛋白包封率
            1.4.4 纳米粒的体外蛋白累积释放率
        1.5 讨论与小结
        参考文献
    第2章 HCQ-OVA-PLGA NPs的体外免疫效应评价
        2.1 本章引论
        2.2 实验材料
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.3 实验方法
            2.3.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的体外摄取
            2.3.2 HCQ-OVA-PLGA NPs对抗原提呈细胞成熟的刺激作用研究
        2.4 实验结果
            2.4.1 HCQ-OVA-PLGA NPs的体外摄取情况
            2.4.2 HCQ-OVA-PLGA NPs对抗原提呈细胞成熟的刺激作用
        2.5 讨论与小结
        参考文献
    第3章 HCQ-OVA-PLGA纳米疫苗的体内免疫评价
        3.1 本章引论
        3.2 实验材料
            3.2.1 动物与细胞
            3.2.2 主要试剂
            3.2.3 主要仪器
        3.3 实验方法
            3.3.1 小鼠肿瘤模型的建立
            3.3.2 肿瘤模型小鼠体内免疫流程
            3.3.3 小鼠血清IgG含量的ELISA分析
            3.3.4 细胞内IFN-γ染色
            3.3.5 流式细胞术评价免疫小鼠的T细胞应答
            3.3.6 肿瘤组织学分析
        3.4 实验结果
            3.4.1 小鼠的肿瘤体积变化与生存期
            3.4.2 血清IgG含量的ELISA分析
            3.4.3 脾免疫细胞内IFN-γ的表达
            3.4.4 淋巴结T细胞免疫应答的类型
            3.4.5 记忆T细胞应答
            3.4.6 肿瘤组织病理学分析
        3.5 讨论与小结
        参考文献
第二部分 小结
全文总结
攻读硕士学位期间发表学术论文
致谢



本文编号：3793130