稳定表达hSPRY/Luc的人膀胱癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型的建立

发布时间：2023-04-21 22:57

　　目的建立稳定共表达人sprouty2(hSPRY2)基因和萤光素酶报告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌细胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型。方法通过PCR扩增hSPRY2及Luc全长基因,并分别构建慢病毒表达载体pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包装慢病毒。用两种病毒上清同时感染人膀胱癌J82细胞,经嘌呤霉素、G418筛选出单克隆细胞株;采用细胞活体成像、免疫荧光细胞化学染色、Western blot法检测hSPRY2和Luc基因在单克隆细胞株中的表达。J82-hSPRY2/Luc细胞皮下接种BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,通过活体成像检测肿瘤生长情况。结果筛选出J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株,并通过活体成像、免疫荧光染色和Western blot验证了hSPRY2和Luc基因的共表达;通过活体成像动态观察到裸鼠皮下移植瘤的生长情况。结论成功建立了稳定共表达hSPRY2和Luc基因的J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌细胞株以及可用于活体成像检测的裸鼠皮下移植瘤模型。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 h SPRY2基因、Luc基因的扩增及序列测定
        1.2.2 慢病毒表达载体p CDH-h SPRY2和p LVX-Luc的构建
        1.2.3 建立稳定表达h SPRY2和Luc的J82-h SPRY2/Luc细胞系
        1.2.4 活体成像技术检测萤光素酶报告基因Luc在单克隆细胞株中的表达
        1.2.5 Western blot法检测h SPRY2和Luc的表达
        1.2.6 间接免疫荧光检测h SPRY2在J82-h SPRY2/Luc细胞中的表达
        1.2.7 裸鼠皮下移植瘤动物模型的建立
2 结果
    2.1 慢病毒表达载体p CDH-h SPRY2-Puro和p LVX-Luc-IRES-Neo的构建
    2.2 萤光素酶生物发光法检测证明Luc基因在单克隆细胞成功表达
    2.3 h SPRY2和Luc J82单克隆细胞株成功表达
    2.4 J82-h SPRY2/Luc细胞共表达h SPRY2及Luc
    2.5 裸鼠皮下移植瘤模型的建立及活体成像检测
3 讨论



本文编号：3796413