轮状病毒VP8*与VP5*蛋白相互作用机制初步研究

发布时间：2023-05-19 18:39

　　轮状病毒是引起婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的主要病原体,其感染是一个多受体介导的、多步骤的复杂过程。刺突蛋白VP4对胰酶敏感,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,进而激活轮状病毒的感染。在轮状病毒的感染过程中,VP8*与VP5*蛋白分离才能够暴露出VP5*蛋白的膜融合区域,进而介导轮状病毒的入胞过程。冰冻电镜的三维重构结果显示:胰酶酶切后,VP8*蛋白仍位于VP5*蛋白的顶端,并通过一段柔性肽与插入基座部分的N端α螺旋相连,维持VP4蛋白结构的稳定性。但是,VP8*与VP5*蛋白相互作用及其在轮状病毒感染过程中的解离机制目前尚不明确。本课题组前期研究中发现,重组表达的羊轮状病毒VP4*蛋白(aa 26-476)免疫小鼠后可以抑制轮状病毒感染导致的排毒和腹泻,并且与天然病毒中的VP4蛋白性质类似,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,为我们研究VP8*和VP5*蛋白之间的相互作用及解离机制奠定了基础。我们首先通过分子对接方法,对轮状病毒VP4蛋白的已有结构进行分析,发现VP8*蛋白在α螺旋之外的区域与VP5*蛋白可能存在相互作用。在此基础上,我们进一步通过蛋白截短和氨基酸定点突变,...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略词(Abbreviation)
第一章 前言
    1. 轮状病毒的形态结构与性质概述
    2. 轮状病毒的基因组概述
    3. 轮状病毒蛋白的结构与功能概述
        3.1. 轮状病毒的结构蛋白
        3.2. 轮状病毒的非结构蛋白
    4. 轮状病毒的分类及流行病学分析
        4.1. 轮状病毒的分类
        4.2. 轮状病毒的流行趋势
    5. 轮状病毒的感染机制
        5.1. 轮状病毒的吸附
        5.2. 轮状病毒的内吞
        5.3. 轮状病毒进入胞质
    6. 本研究目的及意义
第二章 材料与方法
    1. 材料
        1.1. 主要仪器设备
        1.2. 菌种和质粒
        1.3. 病毒和细胞
        1.4. 常用试剂
    2. 方法
        2.1. 常用试剂及培养基配制
        2.2. 常规分子生物学实验
        2.3. 常规细胞生物学实验
        2.4. 蛋白纯化及性质鉴定实验
        2.5. 密度梯度离心检测实验
        2.6. ELISA检测实验
第三章 结果与分析
    1. VP8^*与VP5^*蛋白相互作用研究体系的建立
        1.1. VP8^*与VP5^*蛋白的表达纯化
        1.2. VP8^*与VP5^*蛋白相互作用检测体系的建立
        1.3 小结
    2. VP8^*与VP5^*蛋白相互作用机制研究
        2.1. 基于结构分析VP8^*与VP5^*蛋白相互作用
        2.2. VP8^*蛋白N端截短对VP8^*与VP5^*蛋白相互作用的影响
        2.3. VP8^*与VP5^*蛋白相互作用关键氨基酸的研究
        2.4. 小结
    3. VP8^*与VP5^*蛋白解离机制的研究
        3.1. 唾液酸受体对VP8^*与VP5^*蛋白相互作用的影响
        3.2. 不同pH对VP8^*与VP5^*蛋白相互作用的影响
        3.3. 胞内蛋白酶对VP8^*与VP5^*蛋白相互作用的影响
        3.4. 受体、pH、蛋白酶联合对VP8^*与VP5^*蛋白相互作用的影响
        3.5. 小结
第四章 讨论
    1. VP8^*与VP5^*蛋白相互作用机制及其关键氨基酸
    2. VP8^*与VP5^*蛋白解离机制及其与病毒释放关系
    3. ELISA作为相互作用及解离机制检测方法的局限性
第五章 总结与展望
参考文献
致谢



本文编号：3819886