表位嵌合型乙肝治疗性疫苗在小鼠模型中的治疗策略研究

发布时间：2023-10-21 09:12

　　作为全球流行率最高的慢性病毒性感染疾病,慢性乙型肝炎病毒感染(Chronic hepatitis B virus infectoin)尚缺乏有效治愈药物。当前主要的抗HBV药物包括干扰素α(IFN-α)和核苷/核苷酸类似物(NAs),两类药物能有效抑制HBV病毒复制并部分控制疾病进展,但仅能在极少部分患者(<5%)中实现临床治愈(HBsAg阴转)。现有研究表明,慢性乙肝感染者体内高水平的HBsAg可能是导致宿主免疫耐受的重要原因,新型Anti-HBV药物的研究应有效降低患者体内HBsAg,助力于宿主Anti-HBV免疫应答恢复,从而有效实现HBsAg阴转。本实验室团队在前期研究中发现了能在HBV小鼠模型中高效清除HBV的E6F6抗体,成功鉴定出了其识别表位HBsAgaa119-125,并将带有该表位的多肽SEQ13(HBsAg-aa113-135)展示于类病毒颗粒载体上,构建出了新型表位嵌合型治疗性乙肝疫苗CR-T3-SEQ13。我们已经在多种动物模型中证明该疫苗具有显著的Anti-HBV治疗效果、良好的免疫原性和安全性。但目前尚缺乏对于CR-T3-SEQ13候选疫苗分子在动物模...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
Abbreviations
第一章 前言
    1 乙型肝炎病毒
        1.1 HBV基因组
        1.2 HBV病毒颗粒结构
        1.3 HBV的生命周期
        1.4 HBV的流行病学
    2 乙型肝炎病毒的感染
        2.1 急性HBV感染
        2.2 慢性HBV感染
        2.3 HBV感染的致病机制
    3 乙型肝炎的动物研究模型
        3.1 HBV转基因小鼠模型
        3.2 基于AAV载体的HBV转导小鼠模型
        3.3 pAAV-1.2HBV质粒高压注射小鼠模型
        3.4 人肝嵌合小鼠模型
    4 乙型肝炎的药物治疗
        4.1 核苷类似物
        4.2 α干扰素
        4.3 新型抗乙肝药物
    5 本实验的设计思路、目的和意义
第二章 材料与方法
    1. 材料
        1.1 主要设备
        1.2 主要耗材
        1.3 质粒、菌株、细胞株
        1.4 试剂
        1.5 实验动物
        1.6 常用溶液及培养基配制
    2. 方法
        2.1 分子克隆实验
        2.2 蛋白表达纯化与鉴定
        2.3 细胞生物学实验
        2.4 动物生物学实验
第三章 结果与分析
    1. 小鼠α干扰素(mIFN-α)的制备与活性分析
        1.1 小鼠α干扰素基因的调取
        1.2 小鼠α干扰素蛋白的纯化与鉴定
        1.3 小鼠α干扰素蛋白的去内毒素处理
        1.4 小鼠α干扰素蛋白的活性检测
        1.5 小鼠α干扰素蛋白的体内评估
        1.6 第一部分小结
    2. 乙肝治疗性疫苗蛋白的制备与分析
        2.1 乙肝治疗性疫苗蛋白的纯化
        2.2 乙肝治疗性疫苗蛋白的电镜结构
        2.3 乙肝治疗性疫苗蛋白的去内毒素处理
        2.4 第二部分小结
    3. 乙肝治疗性疫苗免疫程序摸索实验
    4. 乙肝治疗性疫苗与α干扰素蛋白联用实验
        4.1 乙肝治疗性疫苗与α干扰素在转基因小鼠上的联合治疗
        4.2 乙肝治疗性疫苗与α干扰素联合治疗程序摸索
        4.3 第四部分小结
    5. 乙肝治疗性疫苗与核苷类似物联合治疗实验
    6. 乙肝治疗性疫苗与129G1抗体联合治疗实验
    7. 乙肝治疗性疫苗抗体表位分析
        7.1 乙肝治疗性疫苗抗体筛选
        7.2 乙肝治疗性疫苗抗体表位鉴定
        7.3 第七部分小结
第四章 讨论
    1 乙肝治疗性疫苗是具有潜力的治愈慢乙肝的药物
    2 联合治疗是较优的慢乙肝治疗策略
    3 病毒样颗粒载体是较优的表位展示载体
    4 基于治疗性疫苗的免疫增强策略优化
第五章 小结与展望
    小结
    展望
参考文献
致谢
附录



本文编号：3855555