成纤维细胞生长因子受体FGFR1真核表达质粒的构建及其在HEK293T细胞的表达

发布时间：2023-10-27 19:27

　　目的建立一个有效表达FGFR1的真核系统。方法从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到FGFR1基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,构建成pcDNA3.1-FGFR1质粒表达载体,并在HEK293T细胞重组表达;将pcDNA3.1-FGFR1质粒转染HEK293T细胞,通过免疫印迹和免疫荧光检测FGFR1在细胞中的表达情况。结果扩增的FGFR1序列与数据库一致;通过构建表达载体和转染细胞实现了FGFR1c DNA在HEK293T细胞膜上的表达。结论成功扩增出FGFR1 c DNA基因,经过转染HEK293T细胞,实现了FGFR1在HEK293T细胞的高效表达。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验材料
        1.1.1 试剂
        1.1.2 引物设计及合成
    1.2 实验方法
        1.2.1 FGFR1基因的克隆
        1.2.2 pcDNA3.1-FGFR1
        1.2.3细胞培养及细胞基因转染
        1.2.4 免疫印迹检测FGFR1基因在HEK293T细胞中的表达
        1.2.5免疫荧光检测FGFR1基因在HEK293T细胞中的表达
2 结果
    2.1 提取完整的人胎盘组织总RNA
    2.2 克隆FGFR1基因
    2.3 正确构建pcDNA3.1-FGFR1真核表达质粒
    2.4 免疫印迹分析FGFR1基因在HEK293T细胞中的高效表达
    2.5 免疫荧光分析FGFR1基因在HEK293T细胞中的高效表达
3 讨论



本文编号：3857124