DosR抗原Rv1737c诱导巨噬细胞活化及其炎症调节机制研究

发布时间：2023-11-17 20:24

　　潜伏性结核感染阻碍了宿主免疫系统对病原体的根除导致其成为结核杆菌主要储存库和结核病防治的障碍,因此诊断和预防潜伏性结核感染是如今结核病防治的关键。一组由休眠生存调节子(DosR)编码的抗原对于结核杆菌在宿主体内持续存在至关重要。近年来国内外研究显示出DosR抗原在潜伏感染的诊断和新型抗结核疫苗研发方面潜力巨大。本研究所选择的抗原Rv1737c是DosR调节子的一种,主要由潜伏期的结核杆菌表达,目前国内外关于该抗原的报道较少,大部分功能未知。目的:探索DosR抗原Rv1737c在宿主天然免疫和炎症调节中的作用及其机制,为新型抗结核疫苗的研究提供实验基础。方法:通过基因工程技术构建重组质粒pET30a(+)-Rv1737c,通过蛋白原核表达技术获得重组蛋白Rv1737c(rRv1737c)。用rRv1737c处理小鼠腹腔巨噬细胞和PMA诱导后的THP-1细胞。利用Western Blot技术和Real-Time PCR技术检测经过rRv1737c刺激后的巨噬细胞各效应分子表达。通过流式细胞术检测巨噬细胞表面共刺激分子表达,ELISA技术检测细胞上清中各细胞因子浓度,探索rRv1737c在巨...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
    1.1 机体对结核杆菌的识别
    1.2 结核感染的T细胞免疫应答
    1.3 潜伏性结核感染
    1.4 结核杆菌的免疫逃避
    1.5 BCG疫苗的局限性和DosR抗原的研究展望
第一章 载体构建和重组蛋白Rv1737c的表达纯化
    一、材料与方法
        1.1 主要材料和试剂
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验方法与步骤
    二、实验结果
        2.1 重组质粒pET30a(+)-Rv1737c的构建和鉴定
        2.2 重组蛋白的表达纯化和鉴定
    三、讨论
第二章 rRv1737c诱导巨噬细胞活化的机制研究
    一、材料与方法
        1.1 主要材料和试剂
        1.2 主要实验仪器
        1.3 实验方法与步骤
        1.4 统计学分析
    二、实验结果
        2.1 rRv1737c诱导小鼠腹腔巨噬细胞聚集和TLR2表达
        2.2 rRv1737c诱导THP-1细胞TLR2表达上调和NF-κB磷酸化增加
        2.3 rRv1737c上调巨噬细胞表面共刺激分子表达
        2.4 rRv1737c诱导炎症因子分泌
        2.5 rRv1737c诱导IDO1分子表达上调
    三、讨论
第三章 rRv1737c的免疫和保护效果评价
    一、材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要实验材料和试剂
        1.3 主要实验仪器
        1.4 实验步骤与方法
        1.5 统计学分析
    二、实验结果
        2.1 rRv1737c免疫原性
        2.2 rRv1737c对小鼠免疫调节及其肺部组织病理损伤评价
        2.3 rRv1737c调节巨噬细胞聚集和表型
        2.4 rRv1737c激活的巨噬细胞在体外实验中诱导Treg和Th2表型
        2.5 rRv1737c免疫小鼠在高剂量BCG感染后T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-4和IL-10水平
        2.6 rRv1737c免疫小鼠的肺部免疫应答
    三、讨论
结论
参考文献
在学期间的研究成果
致谢



本文编号：3864819