Calcein-AM/PI双染法结合流式细胞术检测γδT细胞毒性的方法

发布时间：2023-12-02 11:52

　　目的建立和优化钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染法结合流式细胞术检测γδT细胞细胞毒活性的方法。方法利用Calcein-AM标记靶细胞,然后与效应细胞共孵育24 h,结束后加入PI,最后流式细胞术检测;通过BD公司绝对细胞计数管验证上述流程的稳定性和可靠性。结果 Calcein-AM能在较低浓度(0.1⁰.5μmol/L)下对靶细胞在宽密度范围(0.1¹0)×106/ml内进行很好标记,而且24 h内对细胞活率无影响,同时还能与未标记细胞进行很好的区分;整个流程具有很好的稳定性和可靠性。结论建立并优化了Calcein-AM/PI双染法结合流式细胞术检测γδT细胞细胞毒效应的方法,本方法除操作简单、重复性好、灵敏度高外,还能更好的区分死亡细胞的来源。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂和仪器
    1.2标本来源和γδT细胞培养
    1.3 Calcein-AM标记靶细胞
    1.4 细胞收集、PI染色和流式检测标准操作程序
    1.5 γδT细胞介导的细胞毒效应检测
    1.6 统计学分析
2 结果
    2.1 Calcein-AM工作浓度与靶细胞密度相关性分析
    2.2 靶细胞平均荧光强度时间动力学变化特征性分析
    2.3 流式细胞仪计数准确性和稳定性分析
    2.4 γδT细胞对Calcein-AM标记靶细胞杀伤功能检测
3 讨论



本文编号：3869613