基于颜色判定的环介导等温扩增检测生殖支原体的研究

发布时间：2023-12-10 15:45

　　目的建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的检测生殖支原体(MG)感染的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5软件依据gap基因保守区域设计4条特异性MG等温扩增引物,通过优化体系dNTPs、MgSO₄浓度,建立一种基于羟基萘酚蓝(HNB)作为结果判读指示剂的MG等温扩增方法,进行灵敏度、特异性检测并与普通PCR比较;对30份性病门诊病例标本进行LAMP、RT-PCR和普通PCR检测,并进行比较分析。结果建立的LAMP方法对8种常见支原体以及8种泌尿生殖道常见病原菌扩增均为阴性,特异性度为100%。对于MG ATCC 33530标准菌株核酸的检测限约为10²copies,与MG普通PCR一致,比MGRT-PCR检测限(10 copies)低一个数量级。30份临床标本使用LAMP、普通PCR和RT-PCR方法的MG阳性检出率分别为16.7%,16.7%和20.0%。结论建立的MG LAMP检测方法灵敏、特异且操作简便,可在基层推广应用。

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【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1 细菌和病毒株
        1.2 标本
    2 方法
        2.1 LAMP引物设计
        2.2 LAMP体系优化
        2.3 LAMP体系、条件及结果判定
        2.4 LAMP灵敏度、特异度和检出限测定
        2.5 标本检测
        2.6 统计学分析
结 果
    1 LAMP体系优化
    2 LAMP的灵敏度和特异度
    3 LAMP检测限
    4 临床标本检测结果
讨 论



本文编号：3872660