血管紧张素Ⅱ通过JNK/c-Jun途径调节DDAH/ADMA/NO系统的研究

发布时间：2024-01-27 00:19

　　目的：本课题利用体外培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVECS),观察ANGⅡ处理下,细胞内JNK/c-Jun通路的激活情况,并 通过抑制JNK/c-Jun通路,观察下游SREBP-1、DDAH-1蛋白质水平的变化及ADMA和NO水平的变化,从而探讨JNK通路在ANG Ⅱ影响DDAH/ADMA/NOS系统中的作用,为阐明ANG Ⅱ引起NO水平变化提供新的视角。 方法：体外培养细胞株HUVECs,同步化处理后,加入不同浓度的ANG Ⅱ,孵育24小时,用Western blot检测p-JNK, p-c-Jun表达水平的改变,从而观察有无JNK/c-Jun信号通路的激活。以最大程度激活JNK/c-Jun通路的ANG Ⅱ处理浓度为最佳处理浓度。加入上述最佳处理浓度的ANG Ⅱ处理HUVECS不同时间,用Western blot检测p-JNK, p-c-Jun表达水平的改变,找出可以最大程度激活JNK通路的ANG Ⅱ最佳处理时间。用以上最佳处理浓度与处理时间的ANG Ⅱ处理HUVECs,用Western Blot检测p-c-...

【文章页数】：50 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 前言
第二章 材料与方法
    2.1 对象,试剂及仪器
        2.1.1对象：人挤静脉内皮细胞株（HUVECS)购于中南大学细胞中心
        2.1.2试剂
        2.1.3主要试剂的配置
    2.2 方法
        2.2.1 人肪静脉内皮细胞株（HUVECS)的培养
        2.2.2 实验分组
        2.2.3 p-JNK/p-c-Jun 蛋白水平测定(Western Blotting)
        2.2.4 JNK阻断剂SP600125处理HUVECS并分组
        2.2.5 Western blot 检测细胞内 p-c-Jun，SREBP-1, DDAH-1 蛋白表达
        2.2.6 细胞培养液上清中ADMA的测定（高效液相色谱法）
        2.2.7 HUVECS中DDAH酶活性测定
        2.2.8 细胞培养液上清NO测定（销酸还原酶法)
            2.2.8.1基本原理
            2.2.8.2 试齐ij
            2.2.8.3 操作过程
        2.2.9 统计学分析
第三章 结果
    3.1 不同浓度ANGⅡ处理下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情况
    3.2 不同ANGⅡ处理时间下,HUVECS中JNK通路及下游C-JUN激活的情况
    3.3 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中SREBP-1的表达的影响
    3.4 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中DDAH-1的表达的影响
    3.5 JNK抑制剂SP600125对HUVECS上清液中ADMA含量的影响
    3.6 JNK抑制剂SP600125对HUVECS中DDAH酶活性的影响
    3.7 JNK抑制剂SP600125对HUVECS上清液中NO含量的影响
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3885958