BCG编码的miRNA鉴定及其功能研究

发布时间：2024-01-27 05:04

　　[目的]微小RNA(microRNA,miRNA)是一类对基因进行转录后水平调控的小分子非编码RNA。近年来,在植物、哺乳动物、果蝇、线虫以及病毒中都发现有大量的miRNA存在且广泛的参与各种生理和病理过程,但是在原核生物中是否也包含miRNA尚未见报道。本研究利用分子生物学技术,生物信息学探索结核杆菌中是否存在miRNA,并确定其在结核杆菌的生长过程中所发挥的作用,进而对原核生物中miRNA的加工机制做了初步探讨。[方法]首先用超声法提取结核杆菌的总RNA,然后将小RNA分离,通过Solexa测序,得到克隆出的小RNA序列信息。随后运用生物信息学软件Mireap对得到的小RNA用软件进行二级结构的预测,观测其是否有特定的二级结构前体。利用Northern Blot方法验证在结核杆菌中是否存在预测到的序列。通过Real-time PCR技术检测这些miRNAs的内源性表达水平。利用电转化的方法将内源性miRNAs封闭或过表达其前体的表达水平,观察其在结核杆菌增殖过程中所发挥的调控作用。最后利用荧光报告系统确定其靶基因。[结果]Solexa测序结果显示,在BCG中存在388种已知miRN...

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图１．１?Ｓｏｌｅｘａ测序小ＲＮＡ长度分布??

图１．５?ｍｉＲＮＡ碱基偏爱性分析??（Ａ）新的ｍｉＲＮＡ在每个碱基上的偏爱性??

图２．１?ｐＹＬ２－ＧＦＰ质粒图谱??３２??

图2:2过表达acc-mix-o}和BCG-miR-21后菌体内相应mRrra水平检}9AB

本文编号：3886354