miR-17-5p靶向信号调节基因SIRPα调控巨噬细胞抗结核分枝杆菌的炎症反应

发布时间：2024-02-02 19:27

　　[目的]验证miR-17-5p对TLRs负向调控因子SIRPα的靶向性,探讨其对抗结核分枝杆菌(MTB)炎症反应的调控作用。[方法]利用生物信息学预测miR-17-5p对SIRPα的靶向性,构建SIRPα野生型和突变型报告载体,利用双荧光素酶报告法、Western Blot、激光共聚焦等技术验证miR-17-5p对SIRPα的靶向性;通过H37Ra感染THP-1巨噬细胞,用miR-17-5p mimics及其inhibitor处理细胞。利用Q-PCR检测H37Ra感染后miR-17-5p的表达;通过免疫荧光、Western Blot和ELISA等技术检测SIRPα和细胞因子TNF-α的表达情况。[结果]H37Ra感染可下调miR-17-5p表达,且随感染复数的增加,下调表达愈加显著;荧光素酶报告法、Western Blot等结果证实miR-17-5p可靶向结合SIRPα3’-UTR,下调SIRPα的表达,进而上调细胞因子TNF-α的表达。[结论]MTB可下调miR-17-5p表达,而miR-17-5p可靶向抑制SIRPα的表达,从而调控巨噬细胞抗MTB的炎症反应。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
        1.1.4 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 细胞模型的构建
            1.2.1. 1 细胞培养
            1.2.1. 2 THP-1巨噬细胞的感染
            1.2.1. 3 THP-1巨噬细胞的转染
            1.2.1. 4 MiR-17-5p表达量的检测
        1.2.2 载体构建及验证
            1.2.2. 1 生物信息学预测靶基因
            1.2.2. 2 载体的构建和鉴定
        1.2.3 靶向关系的验证
            1.2.3. 1 MiR-17-5p表达量的检测
            1.2.3. 2 HEK293T细胞的转染
            1.2.3. 3 双荧光素酶报告系统分析
            1.2.3. 4 SIRPα蛋白表达水平的检测
        1.2.4 激光共聚焦显微镜观察细胞免疫荧光
        1.2.5 ELISA检测炎性细胞因子TNF-α的水平
        1.2.6 统计学分析
2 结果与分析
    2.1 检测H37Ra感染THP-1后miR-17-5p的表达水平
    2.2 载体构建及测序结果验证
    2.3 双荧光素酶法和Western Blot验证miR-17-5p对SIRPα的靶向性
    2.4 免疫荧光染色验证miR-17-5p对SIRPα的靶向性
    2.5 MiR-17-5p对炎性细胞因子水平的影响
3 讨论
4 结论



本文编号：3893042