登革Ⅱ型病毒EDⅢ与登革病毒受体蛋白的鉴定及功能评价

发布时间：2024-02-03 23:37

　　登革病毒(dengue virus,DENV)属黄病毒科,黄病毒属(Flaviviridae),以蚊虫作为传播的中间宿主,通过叮咬人引起和传播登革热,其中以出现登革出血热／登革休克综合征(dengue hemorrhagic fever/dengue shock syndrome,DHF/DSS)更为严重。全球每年约有3亿以上人口受威胁,约50万人可出现症状,感染个体中死亡率为1-5%,儿童患者居多。近年来,由于受到全球气候变暖、生态环境恶化、人口移动频率的增加,使得蚊媒传播区域有扩散的趋势,加剧了登革热流行的范围和频率。在我国的海南、广东、广西、福建等地也多次出现过登革热的暴发流行。世界卫生组织将DHF/DSS列为全球性公共卫生问题之一。 疫苗接种是预防传染性疾病的一种既经济又有效的预防和控制手段。虽然登革疫苗的研究已有五十多年的历史,但是登革热疫苗的研发面临着严峻的挑战：(1)登革病毒血清型多,因而需要研制能对4种血清型DENV的感染同时提供保护作用的四价疫苗；(2)登革疫苗要能提供长期的保护。有研究报道,初次感染20年以后的再感染时仍会发生DHF。(3)还没有合适的复制登革疾病的...

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图1-1RT-PCR扩增的E蛋白全长基因片段Fig.1-1RT-PCRamplificationofEnvelopproteinDNAfragment

T中平衡20min后，在半干转印仪中经半干转PVDF膜放入以50g/L脱脂奶粉的封闭液中1h。Tag单克隆抗体（1: 2500稀释），37°C孵育2h。T洗漆膜6次，每次5 min。加入HRP标记的羊抗小育Ih。T洗漆膜6次，每次5min。按照增强型HRP-DAB结果，显色....

图1-2重组质粒pET-32a⑴-DV2-EDIII的酶切鉴定Fig.1-2IdentificationofplasmidpET-32a(+)-DV2-EDIIIbyrestrictionenzymesdigestion

第一章登革II型病毒EDin蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备32a-EDIII重组质粒双酶切、PCR及核苷酸测序鉴定)PCR纯化的DENV-EDIII产物克隆至pMD18-T载体；（2)双酶切回收纯化目的条带；（3)与经同样双酶切的pET32a质连接产物转化DH5a细菌感受态....

图1-4重组菌BL2丨(DE3)/pET-32a(+)-DV2-EDm表达的SDS-PAGE分析

第一章登革II型病毒EDin蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备3.3pET32a-EDIII/BL21(DE3)重组菌融合蛋白的诱导表达及表达形式的鉴重组质粒pET-28a(+)-DV2-EDlII转化5Z27(DE3)感受态细胞,经Immol/IPTG分别选择37°C和16°....

图1-5对]激酶水解1:肠激酶水解后2:纯化的重组融合蛋白

博士学位论文Lane6:PelletofBL21(DE3)/pET-32a(+)-DV2-EDniaftersonicatioLane7:PurifiedrecombinantproteinwithNi-NTAHis'BindResin;肠激酶酶切融合蛋白....

本文编号：3894829