曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I(SmCaMK I)基因的生物信息学分析与表达鉴定

发布时间：2024-02-25 20:46

　　目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,SmCaMK I进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析。结果 SmCaMK I是一个全长基因,由1 068bp组成,编码355个氨基酸。SmCaMK I与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89%和88%,与人的CaMK I氨基酸序列一致性仅仅只有44%。分子进化树分析中SmCaMK I与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远。与人类CaMK I相比,淋巴细胞表位具有统计学差异。SmCaMK I能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表。结论SmCaMK I是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白。

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【部分图文】：

图１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列构建系统进化树Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ

多房棘球绦虫的ＣａＭＫＩ同源序列属于同一进化分支，证明其亲缘关系最接近；而与人类、鼠类、原核生物分布于不同的分支，在进化上说明亲缘关系较远。图１ＳｍＣａＭＫＩ同源氨基酸序列构建系统进化树Ｆｉｇ．１ＴｈｅｅｖｏｌｕｔｉｏｎｔｒｅｅｏｆＳｍＣａＭＫＩ２．３淋巴细胞表位分析利用Ｂｅｐｉ....

图２Ｂ淋巴细胞表位比对Ｆｉｇ．２ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

７１、ａａ１９５－ａａ１９９、ａａ２０９－ａａ２１９、ａａ２３６－ａａ２４６、ａａ２６２－ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５个Ｔ淋巴细胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。将ＳｍＣａＭＫＩ与....

图３Ｔ淋巴细胞表位比对Ｆｉｇ．３ＴｈｅａｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｅｐｉｔｏｐｅｓ

ａａ２６８、ａａ３５０－ａａ３５５）和５个Ｔ淋巴细胞表位（７７ａａ－８５ａａ、９３ａ－１０１ａａ、１７３ａａ－１８１ａａ、１８８ａａ－１９６ａａ、３２７ａａ－３３５ａａ）。将ＳｍＣａＭＫＩ与人类ＣａＭＫＩ抗原表位进行对比发现，Ｂ细胞表位重合率较高，但是对应的编码氨基酸差异较大，并....

图６ＳｍＣａＭＫＩ蛋白的Ｈｉｓ识别和抗原性鉴定Ａ为Ｈｉｓ单克隆抗体识别；Ｂ为ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清识别

ｏｎｏｆＳｍＣａＭＫＩ３讨论ＣａＭＫＩ广泛存在于各组织的细胞中，作为一个细胞内级联反应的信号分子［２０］，其对于下游靶酶的磷酸化和对细胞周期的调控起着重要的作用，主要在细胞中参与信号转导和调控细胞增殖。有研究Ａ为Ｈｉｓ单克隆抗体识别；Ｂ为ＳｍＣａＭＫＩ蛋白免疫大鼠的免疫血清识别。....

本文编号：3910833