弓形虫MAPK1核酸疫苗对小鼠的免疫保护作用研究

发布时间：2024-02-26 23:02

　　刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,在人和家畜等中间宿主体内可引发普遍的人畜共患弓形虫病。据报道,全球有多达20-30%的人感染弓形虫,且感染后没有有效的药物可以根治。考虑到目前还没有可使用的弓形虫疫苗,同时化学药物治疗将会给人体带来许多的副作用,故研制一种安全有效的弓形虫疫苗对控制人类和动物的弓形虫感染具有十分重要的意义。基于弓形虫MAPK1抗原良好的免疫原性和免疫反应性,本次研究我们选用了弓形虫MAPK1基因构建DNA疫苗。目的:构建弓形虫MAPK1抗原的真核表达质粒,制备弓形虫MAPK1的DNA疫苗,评价该疫苗所产生的免疫保护效应,同时也进一步探索MAPK1蛋白作为弓形虫疫苗候选抗原的可能性。方法:提取弓形虫RH株的RNA,通过RT-PCR技术逆转录形成cDNA,以cDNA作为PCR模板扩增出TgMAPK1基因。TgMAPK1基因的胶回收片段与TA克隆载体pEASY-T1连接构建重组质粒,之后进行PCR、双酶切鉴定并胶回收TgMAPK1基因片段。将上述胶回收产物与真核表达载体pEGFP-C1连接构建重组质粒pEGFP-MAPK1并进行PCR、双酶切及测序鉴定。重组质粒转染真核细胞...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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图１?ＰＣＲ产物鉴定结果??Ｍ：?ＤＮＡ标记物；１：扩增的ＭＡＰＫ１基Ｆｉｇ．?１?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ２．重组质粒ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ的ＰＣＲ鉴定??以提取的重组....

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图４：?ＭＡＰＫ１基因片段的ＢＬＡＳＴ比对结果??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ＢＬＡＳＴ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＭＡＰＫ１?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ??５．表达蛋白的荧光检测??脂质体介导质粒转染真核细胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重组质粒组（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空质粒组（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ....

图５表达蛋白的荧光检测??－－

脂质体介导质粒转染真核细胞ＨＥＫ２９３Ｔ，重组质粒组（ｐＥＧＦＰ－ＭＡＰＫｌ）和??空质粒组（ｐＥＧＦＰ－Ｃｌ）经荧光显微镜可观察到绿色荧光，而空白对照组无荧光呈??现，表明在真核细胞内该重组质粒可有效表达，见

本文编号：3911993