外层致密纤维在Akap4基因缺陷致小鼠精子尾部多种形态异常中的作用

发布时间：2024-03-09 16:01

　　目的:探讨外层致密纤维(outer dense fobres,ODF)在Akap4基因缺陷引起小鼠精子尾部多种形态异常中的作用。方法:通过基因编辑技术构建Akap4基因缺陷小鼠模型。实验分为2组:成年Akap4基因缺陷雄鼠为实验组(n=7),成年野生型雄鼠为对照组(n=7),比较2组小鼠的体重和睾丸重量;采用计算机辅助精液分析(computer aided sperm analysis,CASA)检测精子活动力,改良巴氏染色(modified pap staining)检测精子形态学,扫描及透射电镜观察精子超微结构,免疫荧光检测精子尾部蛋白表达及定位,睾丸切片HE及PAS染色检测睾丸生精功能,透射电镜观察曲精细管超微结构。结果:Akap4基因缺陷小鼠精子总活动力为8.81%,明显低于野生型小鼠(P<0.01),且无正常形态精子,尾部缩短与尾部卷曲比例达91.18%,明显高于野生型小鼠(P<0.01),睾丸重量、睾丸生精功能、精子数量2组比较差异无统计学意义(P>0.01);Akap4基因缺陷精子的纤维鞘纵柱缺失,横肋柱结构部分残留,主段的3和8号ODF排列紊乱,与OD...

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【部分图文】：

图1Akap4基因缺失使小鼠精子活动力低下

提取敲除小鼠的DNA,利用PCR技术对小鼠进行基因型鉴定(图1B)。与WT小鼠对比,Akap4-KO小鼠精子活动力低下(图1C)。WT与Akap4-KO小鼠精子比较,在A级快速前向运动、B级慢速前向运动、C级非前向运动、D级极慢或不动的比例方面,差异具有统计学意义(P<0.01,....

图2Akap4基因缺失使小鼠尾部异常

与WT小鼠对比,Akap4-KO小鼠精子尾部缩短、卷曲,主段结构紊乱,微管从精子尾部脱离(图2A)。Akap4-KO小鼠无正常精子,尾部缩短与卷曲的比例达到91.18%(P<0.01,图2B)。二者的精子尾部缺失和成角的比例差异无统计学意义(P>0.01)。与WT小鼠精子扫描电镜....

图3Akap4-KO雄性小鼠睾丸超微结构异常

WT小鼠与Akap4-KO小鼠曲精细管第VIII时期的HE染色结果提示两者生精功能无明显差异(图3A),PAS染色也未见明显差异(图3B)。与WT小鼠睾丸比较,Akap4-KO小鼠睾丸精子未见FS发育(图3C),而ODF无明显异常。从中段到主段末端的精子横截面观察精子尾部附属结构....

图4Akap4-KO雄性小鼠精子超微结构异常

图3Akap4-KO雄性小鼠睾丸超微结构异常3讨论

本文编号：3923594