利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体

发布时间：2024-03-26 04:09

　　本研究在人绒毛膜促性腺激素(hCG)的结合多肽的基础上应用嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体,简化单域抗体制备过程,提高多肽生化稳定性。利用单域抗体通用骨架(cAbBCII10),以hCG结合多肽取代互补决定区CDR1或CDR3,合成cAbBCII10嫁接抗体全基因序列并与sfGFP基因序列融合后,插入到带有His标签的原核表达载体pET30a(+)中,成功构建了pET30a-(His6)-cAbBCII10-CDR1/hCGBP1-sfGFP与pET30a-(His6)-c AbBCII10-CDR3/hCGBP3-sfGFP融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达融合蛋白,得到高表达量的可溶性融合蛋白。利用Ni-NTA亲和柱纯化得到纯蛋白,应用SDS-PAGE鉴定纯化的蛋白为正确表达的目标蛋白。通过抗原抗体结合实验,发现hCG结合多肽嫁接到单域抗体通用骨架的互补决定区CDR1或CDR3后都有抗原结合活性,具有相似的抗体滴度,且嫁接到CDR3后的抗原结合活性比CDR1要高(2-3倍)。嫁接抗体基本保留了所用单域抗体框架较为稳定的生化特性、具有一定的...

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1重组质粒pET30a-anti-hCG-α和pET30a-

P重组子经BamHⅠ和HindⅢ酶切鉴定后得到两条目的带，大小约为5.3kb和1.2kb，分别与质粒和抗体基因及抗体融合蛋白基因片段的预期分子量一致(图1)。将酶切鉴定正确的质粒进行DNA测序鉴定，测序结果与预期的序列一致，证明3个重组质粒构建成功。2.2融合蛋白的诱导表达分析将....

图2anti-hCG-和cAbBCII10-hCGBP1/3-sfGFP融合蛋白的表达Fig.2Expressionofanti-hCG-andcAbBCII10-hCGBP1/3-sfGFPfusionproteins.(A)Expressionof

单域抗体：010-64807509：cjb@im.ac.cn573SDS-PAGE分析，结果如图2所示。经IPTG诱导后，在3组样品中均获得了目标蛋白的高表达，并且大部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，仅有少量在沉淀中。2.3融合蛋白的纯化与鉴定pET30a-anti-h....

图4融合蛋白cAbBCII10-hCGBP1/3-sfGFP结合hCG的活性测定

SSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程学报ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn5742.4融合蛋白的浓度测定及抗体融合蛋白的抗原结合活性分析通过BSA蛋白测定法可以得出pET30a-anti-hCG-α、pET30a....

图5抗体融合蛋白的稳定性测定Fig.5DeterminationofthestabilityofcAbBCII10-

彭静等/利用抗原结合多肽嫁接抗体技术制备抗hCG单域抗体：010-64807509：cjb@im.ac.cn575图5抗体融合蛋白的稳定性测定Fig.5DeterminationofthestabilityofcAbBCII10-hCGBP1/3-sfGFPfusionprote....

本文编号：3939341