MERS冠状病毒主蛋白酶与N3抑制剂复合物的结构功能研究及SARS冠状病毒解旋酶的晶体学研究

发布时间：2024-04-20 10:16

　　自2012年起,一种新型冠状病毒——中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East Respiratory Syndrome coronavirus, MERS-CoV)持续在中东地区蔓延,已造成上百例感染病例,致死率高达50%。这是继2003年爆发的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus, SARS-CoV)、2004年发现的人类冠状病毒NL63(Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63)以及2006年发现的人类冠状病毒HKU1(Human Coronavirus HKU1, HCoV-HKU1)之后发现的又一个人类冠状病毒家族的新成员,这表明冠状病毒对人类健康的威胁始终存在,然而到目前为止,在世界范围内还没有切实有效的能用于临床治疗MERS-CoV、SARS-CoV等冠状病毒感染的疫苗或特效药物。 冠状病毒作为单股正链RNA病毒,编码约16个非结构蛋白(non-structural proteins, nsps)介导自身的转录复制过程。这其中,nsp5(即主蛋白酶)参与将冠状...

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
图和附表清单
主要符号对照表
第一章 引言
    第一节 选题背景及意义
    第二节 冠状病毒的研究简史、分类和引发的疾病
        1.2.1 冠状病毒的研究简史
        1.2.2 冠状病毒的分类
        1.2.4 冠状病毒引起的疾病
        1.2.5 冠状病毒引起的疾病的防治
    第三节 冠状病毒的研究概况
        1.3.1 冠状病毒的基因组结构
        1.3.2 冠状病毒的生活周期
        1.3.3 冠状病毒的复制转录机制
        1.3.4 冠状病毒RTC的组成
    第四节 MERS-CoV nsp5的研究意义
        1.4.1 冠状病毒nsp5的研究意义
        1.4.2 冠状病毒nsp5的研究现状
        1.4.3 冠状病毒nsp5抑制剂的研究现状
        1.4.4 冠状病毒nsp5及其抑制剂研究过程中的注意点
        1.4.5 MERS-CoV nsp5与N3复合物结构的研究意义
    第五节 本课题的研究内容与意义
    第六节 论文结构安排
第二章 MERS-CoV nsp5与抑制剂N3的复合物晶体制备
    第一节 MERS-CoV nsp5的基本信息
        2.1.1 MERS-CoV nsp5的基因序列
        2.1.2 MERS-CoV nsp5的生物化学信息
        2.1.3 MERS-CoV nsp5折叠情况预测
        2.1.4 MERS-CoV nsp5的同源蛋白分析
        2.1.5 小结
    第二节 MERS-CoV nsp5基因的克隆与表达载体的优化
        2.2.1 MERS-CoV nsp5基因的获取
        2.2.2 表达系统的选择
        2.2.3 表达载体的选择
        2.2.4 重组质粒的构建
    第三节 MERS-CoV nsp5重组蛋白的表达与纯化
        2.3.1 MERS-CoV nsp5重组蛋白的表达
        2.3.2 MERS-CoV nsp5重组蛋白的纯化
    第四节 MERS-CoV nsp5蛋白的晶体生长与初步数据收集
        2.4.1 蛋白质结晶的基本原理
        2.4.2 MERS-CoV nsp5结晶条件的初步筛选和优化尝试
        2.4.3 MERS-CoV nsp5与N3复合物晶体的生长与优化
第三章 MERS-CoV nsp5-N3复合物的结构功能研究
    第一节 结构解析原理简介
        3.1.1 相位问题的存在
        3.1.2 常用结构解析方法简介
    第二节 MERS-CoV nsp5-N3复合物的结构解析
        3.2.1 数据收集和处理
        3.2.2 结构解析过程
    第三节 MERS-CoV nsp5与N3复合物的结构分析
        3.3.1 MERS-CoV nsp5与N3的总体结构
        3.3.2 MERS-CoV nsp5与N3的结合情况分析
    第四节 N3分子抑制MERS-CoV nsp5的酶活验证实验
        3.4.1 MERS-CoV nsp5的活性检测原理
        3.4.2 MERS-CoV nsp5的酶活实验方法
        3.4.3 N3对MERS-CoV nsp5的抑制活性
        3.4.4 小结
第四章 SARS-CoV nsp13的晶体学研究
    第一节 SARS-CoV nsp13的研究进展及意义
        4.1.1 SARS-CoV nsp13的功能研究进展
        4.1.2 SARS-CoV nsp13结构生物学研究的意义
    第二节 SARS-CoV nsp13重组质粒的构建
        4.2.1 SARS-CoV nsp13基本信息分析
        4.2.2 SARS-CoV nsp13表达载体的选择
        4.2.3 SARS-CoV nsp13表达载体的构建
    第三节 pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表达、纯化与结晶尝试
        4.3.1 pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表达与纯化
        4.3.2 pGEX-6p-1-nsp13野生型和突变体蛋白结晶尝试
    第四节 pET-28a-nsp13克隆的蛋白表达、纯化与结晶
        4.4.1 pET-28a-nsp13克隆的蛋白表达与纯化
        4.4.2 pET-28a-nsp13蛋白的结晶
    第五节 pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表达、纯化与结晶
        4.5.1 pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表达与纯化
        4.5.2 pET-28a'-nsp13蛋白的结晶
    第六节 pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白晶体制备与数据收集
        4.6.1 pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白表达与纯化
        4.6.2 pET-28a-6×His-nsp13蛋白的结晶
        4.6.3 pET-28a-6×His-nsp13蛋白质晶体的数据收集和处理
第五章 结论
附录A MERS-CoV nsp5的编码碱基与氨基酸序列
附录B SARS-CoV nsp13的编码碱基与氨基酸序列
参考文献
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3959266