汉滩病毒微基因组的构建与评价

发布时间：2024-04-22 05:59

　　目的建立汉滩病毒(Hantaan virus, HTNV)微基因组系统,并进行初步评价。方法用分子克隆方法构建HTNV微基因组系统所需的微基因组质粒和表达核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, NP)、RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRp)的辅助质粒,转染HEK-293T细胞;并在辅助病毒添加与否的情况下进行验证。结果成功构建了基于HTNV L片段非编码区的绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)和Gaussia荧光素酶(gaussia luciferase, Gluc)的微基因组质粒,GFP微基因组在辅助病毒HTNV感染的情况下可观察到明显绿色荧光,Gluc微基因组在辅助病毒感染或者辅助质粒共转染情况下均可检测到Gluc的表达。结论成功建立了HTNV的微基因组系统,为研究HTNV的复制机理和抗病毒药物的筛选提供了重要工具。

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【部分图文】：

图2辅助质粒的构建与鉴定

图1微基因组质粒的构建与鉴定2.2GFP微基因组系统的活性评价

图4Gluc微基因组系统的活性评价

图3GFP微基因组质粒的活性鉴定(×200)3讨论

图1微基因组质粒的构建与鉴定

辅助质粒构建与鉴定:①通过亚克隆获得NP哺乳动物表达质粒pCAG-NP,并经EcoRI和KpnI双酶切鉴定可观察到大小约1.3kb目的条带,见图2A;②分片段全基因合成的pUC-L1、pUC-L2和pUC-L3经KpnI和SalI双酶切后获得相应大小的目的条带,见图2B....

图3GFP微基因组质粒的活性鉴定(×200)

在细胞培养上清中,与单转质粒组相比,感染HTNV可明显提高Gluc水平,但三转质粒组仅有较低水平的升高;三转质粒并感染HTNV组与三转质粒组的Gluc水平相差不大。因为Gluc具有信号肽,表达产物主要分泌至细胞上清,所以在细胞裂解液中Gluc水平相差不大,见图4。图4Gluc微....

本文编号：3962028