基于Percoll的大鼠脊髓突触体的制备

发布时间：2024-04-23 23:19

　　目的:通过匀浆大鼠脊髓,利用基于Percoll的密度梯度离心技术,构建一种用时短、分层清晰、稳定、高效制备大鼠脊髓突触体(Synaptosomes,Syn)的方法。方法:用断头法将大鼠快速处死,取出除去马尾部分的脊髓组织,用大量的预冷的蔗糖/EDTA缓冲液(10ml/g)清洗3次以除去血液成分,滤纸吸干。每克脊髓组织加入9ml预冷的蔗糖/EDTA缓冲液,置于15ml的预冷玻璃匀浆器中,轻轻匀浆10次。将匀浆液置于10ml试管中,4℃离心10min,1000g。小心的吸出上清液置于干净的预冷试管中,用BCA法测定上清液蛋白浓度,调节蛋白浓度至4-5mg/ml,即S1部分。将2ml S1部分轻轻的加入至3%Percoll分层之上,19500g,离心10min(调整离心机加速减速500r/min),将10%Percoll、15%Percoll、23%Percoll分层之间的高密区(F3、F4)轻轻的吸取出置于干净的预冷的离心管中,加入大量的PBS缓冲液,离心10min,14000g,弃上清,3次,4℃保存,将沉淀重悬于PBS中备用。将上述制备的沉淀悬浮液,制备标准电镜切片,电镜观察。运用免疫...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2经不连续性Percoll密度梯度离心法离心后分层情况

速的将脊髓组织剪碎，置于预冷的蔗糖蔗糖/EDTA缓冲液），然后用移液器将上中，上下研磨10次。最后将研磨后的匀管中。触体的制备3K15-离心机中，4℃离心10min，3600部分，去除沉淀。置于预冷的试管中。述S1部分，用BCA蛋白测定法测定蛋白白浓度为4-....

图3A表示一组突触体,B和C表示附着于突触前膜的突触后致密体（PSD），D突触体（Syn）

兰州大学硕士研究生学位论文基于Percoll的大鼠脊髓突触体的制备第四章实验结果4.1电镜观察结果通过电镜可以清晰的观察到椭圆形的脊髓突触体，脊髓突触体形态结构完整，可见突触体成椭圆形，包膜完整，其内含有大量的突触小泡、单个或多个线粒体，突触前成分、突触间隙、突触后致密....

图4WesternBlot条带图

成本实验不连续性Percoll方案（%）不连续性Percoll方案1（%）不连续性蔗糖方案2（%）不方体71.8±3.25.9±1.81.8±1.218.4±2.370.2±2.23.3±0.62.1±0.724.3±1.54843456010No20F4部分为....

本文编号：3962899