Koutango病毒TaqMan反转录聚合酶链式反应方法的建立

发布时间：2024-04-24 23:54

　　目的建立Koutango病毒(KOUTV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载KOUTV基因序列,进行多序列比对分析,针对NS5基因中的高保守序列片段设计KOUTV的特异引物与探针,用4科9种病毒进行检测方法特异性验证,通过平行重复实验验证检测方法稳定性,利用体外转录的RNA标准品建立了KOUTV的NS5基因拷贝数的绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%,定量分析模型灵敏度达到1.0×10²拷贝/反应。通过本研究建立的快速检测方法对新疆采集的112批,6 328只蚊虫进行了测定,结果均为阴性。结论成功建立了KOUTV的高特异性、高敏感性的TaqMan RT-PCR检测方法,可应用于实验室和临床诊断。

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【部分图文】：

结果图1KOUTV检测体系特异性验证结果Figure1EvaluationofspecificityofTaqManRT-PCRassayforKOUTVdetection表2KOUTV检测体系重复稳定性

2.4检测体系稳定性7个不同浓度（1×102～1×108拷贝/反应）RNA样品的3次平行重复实验，各样品Ct值的s值均小于0.5，CV值均小于1.5%（表2），这表明该检测体系稳定性良好。2.5蚊虫样本检测采集112批次共6328只蚊虫，对标本研磨液提取RNA后，利用建立的Taq....

图2KOUTV基因拷贝数定量分析标准曲线Figure2StandardcurveofKOUTVTaqMan

UTVdetection稀释度Ct值ˉxsCV(%)第1轮第2轮第3轮1×10814.3914.4514.4314.420.020.141×10716.4016.4516.4316.430.020.121×10619.6120.0620.0819.920.221.101×1052....

本文编号：3963692