严格调控表达HCVNS3/4A蛋白三转基因小鼠的建立

发布时间：2024-04-28 05:21

　　丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）是引起慢性肝病的主要病原体，目前全球约有1.7亿HCV感染者。由于HCV的高度变异性，至今尚无特异有效的疫苗和治疗药物，因而其感染已成为全球性的严重的公共卫生问题之一。 自1989年首次分离和鉴定出HCV至今，对HCV的防治研究一直进展缓慢。其原因主要是由于HCV感染高度严格的种属嗜性导致有效、稳定的实验动物模型的缺乏。这不仅严重阻碍了对HCV感染和致病机制的研究，而且也极大地限制了抗病毒药物和疫苗的开发。 HCV基因组RNA编码的NS3/4A蛋白具有丝氨酸蛋白酶和解旋酶活性。体外实验研究表明，HCV NS3/4A蛋白在蛋白前体的加工成熟、RNA复制以及病毒装配等过程中发挥着关键作用。因此，NS3/4A蛋白已成为目前抗HCV药物研发中最为重要的靶点之一。不仅如此，NS3/4A丝氨酸蛋白酶靶向作用于感染细胞内非病毒复制相关的宿主蛋白，通过阻碍干扰素合成信号的传递等介导病毒的免疫逃逸与感染慢性化。这提示，靶向NS3/4A丝氨酸蛋白酶的抑制剂可能具备阻断感染细胞内病毒的复制和恢复感染细胞内固有免疫防御应答的双重作用。 为了进一步在动物...

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【部分图文】：

图1-1质粒pTet-On示意图

正文构建Tet-On和Cre/LoxP系统双表达HCVNS3/4A蛋白的真核表控系统质粒pTet-On及pBI-G由德国海德堡大；重组质粒pBluescript-ⅡSK-LoxP-FLuc-BGHA及pBI-G//Cre由本课题组赵亚博士、....

图1-2质粒pBI-G示意图

图1-2质粒pBI-G示意图Fig.1-2RestrictionmapofplasmidpBI-G胞系菌（E.coli）HB101株由本室保存。由本室保存。主要工具酶及相关试剂收试剂盒、质粒小量提取试剂盒等购自天根公提取、纯化试剂盒购自Promega公司....

图1-3pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4A的构建示意图

第四军医大学硕士学位论文，得到pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3n系统单独调控时转录产生含Fluc编码序列的mRCre/LoxP系统调控时，Cre重组酶特异性剪接Lo动子启动转录后产生的mRNA包含NS3/A蛋白....

图1-4重组质粒pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4A的酶切鉴定

质粒pBI--G//LoxP-FLuc-BGHPolyA-LoxP-NS3/4AedigestionanalysisofpBI--G//LoxP-FLuc-BGHPoly5000DNAMarker；M1：500~12000DNAwiderange....

本文编号：3966225