糖皮质激素通过PI3K/Akt细胞信号传导通路诱导内皮祖细胞功能失调

发布时间：2024-05-15 18:25

　　【目的】糖皮质激素的应用是引起非创伤性股骨头缺血性坏死的重要危险因素，而非C创伤性股骨头缺血性坏死患者往往伴随着内皮祖细胞数量和功能的改变，明确糖皮质激素对内皮祖细胞数量和功能的影响及其作用机制，对疾病的预防和早期治疗具有重要的意义。 【方法】（1）密度梯度离心法分离新生儿脐带血单个核细胞并培养于EGM-2培养基中，通过形态学观察、结合FITC-标记荆豆凝集素-1和吞噬DiL-标记乙酰化低密度脂蛋白双染实验、量子点免疫荧光技术检测内皮型一氧化氮合成酶的蛋白表达以及体外小管形成能力对内皮祖细胞进行鉴定；（2）采用不同浓度地塞米松干预内皮祖细胞，CCK-8和EdU试剂盒检测细胞增殖能力、Transwell小室检测细胞迁移能力、小管形成实验检测细胞体外小管形成能力、一氧化氮检测试剂盒检测一氧化氮生成浓度；（3）分别使用MAPK/ERK细胞信号通路特异性抑制剂PD98059和PI3K特异性抑制剂LY294002和Wortmannin预先干预内皮祖细胞，Western blotting和实时定量RT-PCR检测糖皮质激素对内皮祖细胞Akt和eNOS的表达的影响。 【结果】（1）脐带血分离的单个核...

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图1密度梯度离心分离单个核细胞APBS稀释后脐带血铺于人淋巴细胞分离液，界面完整；B离心后可见分为四层，从上至下依次为：血浆层、单个核细胞层、分离液

图1密度梯度离心分离单个核细胞APBS稀释后脐带血铺于人淋巴细胞分离液，界面完整；B离心后可见分为四层，从上至下依次为：血浆层、单个核细胞层、分离液层和红细胞层。2内皮祖细胞的鉴定2.1内皮祖细胞形态学分离的单个核细胞形态较小，大小均一，细胞呈圆形；第4天可见....

图2培养的细胞形态学观察A刚分离的单个核细胞形态较小,圆形,不均匀悬浮分布于培养板底部(×100);B

图2培养的细胞形态学观察A刚分离的单个核细胞形态较小,圆形,不均匀悬浮分布于培养板底部(×100);B培养第4天可见贴壁细胞形成较多的细胞集落,大小不一,呈发芽式向外生长(×100);C培养第7天可见细胞形成较大的集落,中心有部分细胞坏死,周围细胞呈梭形,放射状....

图3激光共聚焦显微镜下细胞双染阳性（×400）

20图3激光共聚焦显微镜下细胞双染阳性（×400）A细胞双染色阳性；BDAPI标记细胞核呈蓝色荧光；C细胞膜结合FITC标记荆凝集素-1呈绿色荧光；D细胞摄取DIL标记乙酰化低密度脂蛋白呈红色荧光。2.3小管形成实验内皮祖细胞在Matrigel基....

图4小管形成实验内皮祖细胞在Matrigel基质胶上生长，48h可见细胞互相连接，形成典型的小管状结构（×100倍）

小管形成实验内皮祖细胞在Matrigel基质胶上生长，48h可见细胞型的小管状结构（×100倍）。量子点免疫荧光检测内皮祖细胞表达内皮型一氧化氮合成酶。皮型一氧化氮合成酶位于细胞浆,量子点在545nm激发波长下显示红

本文编号：3974043