miRNA-34a基因敲除DBA1/J小鼠的建立

发布时间：2024-05-18 18:02

　　目的:利用CRISPR/Cas9技术,构建全基因组微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)基因敲除DBA1/J小鼠,并进行繁殖、鉴定。方法:根据CRISPR/Cas9原理,构建出miR-34a-/+DBA1/J鼠为F0代小鼠;将其与DBA1/J野生型小鼠进行杂交,通过PCR鉴定筛选出基因型为miR-34a-/+的F1小鼠;筛选miR-34a-/-的F2代小鼠,分析其生长特性、繁殖能力;通过流式细胞术检测小鼠体内免疫器官和外周血中T、B淋巴细胞比例。结果:获得2只F0代小鼠,4只F1代小鼠,5只F2代小鼠;与DBA1/J小鼠比较,miR-34a-/-DBA1/J小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群比例没有显著变化(P> 0. 05),但B淋巴细胞比例明显增加(P <0. 05);未发现miR-34a-/-DBA1/J小鼠的体重、繁殖能力有明显的改变(P> 0. 05)。结论:通过CRISPR/Cas9技术成功敲除miR-34a基因并繁殖获得目的小鼠。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 miR-34a基因敲除DBA1/J小鼠的构建
        1.2.1 CRISPR/Cas9靶向位点的设计及Cas9 mR-NA和sgRNA的制备
        1.2.2 sgRNA和Cas9 mRNA显微注射入小鼠受精卵
        1.2.3 miR-34a基因敲除小鼠的饲养、繁殖
        1.2.4 miR-34a基因敲除小鼠鉴定
        1.2.5 miR-34a基因敲除小鼠基因测序鉴定
        1.2.6 流式细胞术分析miR-34a基因敲除鼠体内T、B淋巴细胞比例
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 构建的F0代小鼠鉴定结果
    2.2 F1代小鼠鉴定与繁育情况
    2.3 F2代小鼠鉴定与繁育情况
    2.4 F2代小鼠测序、miR-34a表达与繁育情况
    2.5 miR-34a基因敲除鼠T、B淋巴细胞比例
3 讨论



本文编号：3977159