金黄色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表达

发布时间：2017-05-27 00:10

  本文关键词：金黄色葡萄球菌α-溶血素的克隆及可溶性融合表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:表达纯化可溶性金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-HL)作为抗原,用以后期制备全人源抗α-HL抗体,为金黄色葡萄球菌感染提供新的治疗手段。方法:提取金黄色葡萄球菌总RNA,经反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,扩增α-HL cDNA,将cDNA双酶切后与载体pCold-TF连接,转化E.coli TOPO 10,菌落PCR及测序验证插入基因的正确性。将测序正确的α-HL/pCold-TF重组质粒转化E.coli BL21进行低温诱导表达,SDS-PAGE和Western blot验证表达产物的正确性。结果:PCR扩增得到的α-HL基因大小为900 bp左右;将重组质粒α-HL/pCold-TF转化E.coli BL21,经15℃低温诱导表达24 h,诱导得到可溶性的α-HL融合蛋白,融合蛋白大小为90 kD左右(载体上的TF分子伴侣大小为45 kD左右);经Western blot验证表达纯化的蛋白为α-HL融合蛋白。将纯化的α-HL蛋白注射BABL/c小鼠制备抗血清,结果显示抗血清与金黄色葡萄球菌结合良好,效价大于10 000倍。结论:成功对α-HL进行了基因克隆,并成功表达纯化到可溶性的α-HL融合蛋白。
【作者单位】： 四川医科大学基础医学院;
【关键词】： 金黄色葡萄球菌 α-HL 可溶性表达
【基金】：四川省科技厅项目(LY-96,013SZZ005) 泸州市科技局项目(2013LZLY-K77)
【分类号】：R392
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类感染性疾病的重要病原体,特别容易引发肺炎、皮肤脓肿和菌血症,感染后具有很高的死亡率。抗生素是治疗金黄色葡萄球菌感染的主要手段,长期以来是有效的。随着近年世界范围内的抗生素滥用越来越严重,金黄色葡萄球菌出现了对几乎所

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