新型半胱氨酸蛋白酶抑制剂DsCystatin纳米抗体的制备以及受甲基化调控的USP44基因在食管鳞癌中作用机制的研究

发布时间：2024-06-28 04:54

　　骆驼血清中能表达一种没有轻链的抗体,通过克隆其可变区获得了目前已知分子量最小的抗原结合片段,称为纳米抗体。与传统抗体相比,纳米抗体的分子量小,亲水性高,比较容易地与其他分子或前体药物共价连接。因此在新药开发、临床诊断等方面具有广阔的开发前景。Cathepsin蛋白家族在免疫细胞内参与抗原降解、加工和传递,进而调节宿主的免疫反应。而人体被蜱叮咬后,蜱唾液腺中的Ds Cystatin蛋白会被分泌到人体内,抑制Cathepsin蛋白家族的活性,帮助蜱长时间在宿主上吸血,逃避宿主免疫反应,促进了蜱携带的病原体传播到宿主体上。我们希望能获得针对Ds Cystatin蛋白的纳米抗体,以便帮助人们在关于蜱叮咬方面的诊断治疗中发挥作用。本研究中我们采用原核表达系统获得带有GST标签的Ds Cystatin融合蛋白,利用GST标签纯化该蛋白。纯化后的蛋白带有GST标签,使用procession蛋白酶切除,最终得到单一的Ds Cystatin抗原蛋白。用纯化后的抗原蛋白免疫健康的双峰驼,经过数次的免疫后以其外周血为材料建立纳米抗体免疫文库,利用噬菌体展示技术通过吸附、洗脱、富集等一系列操作筛选具有抗原特异...

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图1.1抗体结构

1图1.1抗体结构系统的重要组成部分，抗体可以保护机体免受外来异物学研究领域，抗体也是一类使用极其频繁的试剂，在蛋

图1.2骆驼血清抗体IgG结构图

图1.2骆驼血清抗体IgG结构图

图1.3单域抗体模图[39]

4图1.3单域抗体模图[39]

图2.1目的片段序列与PGEX-6P-2质粒图谱

图2.1目的片段序列与PGEX-6P-2质粒图谱2.2.2DsCystatin蛋白的诱导表达将构建好并测序正确的重组载体经BL21（DE3）感受态细胞转化后，挑取单隆菌落摇菌。经过多次实验条件的摸索，我们最终选取诱导温度30℃、IPTG终浓

本文编号：3996460