树鼩调节性T细胞（Treg） CD4/CD127基因的克隆及表达

发布时间：2024-06-29 20:58

　　人类乙型肝炎病毒HBV可特异侵染人类肝组织,引起急性或慢性乙型肝炎,从而诱发肝硬化、肝癌。目前,世界范围内约有20亿HBV感染引起的肝炎患者,其中约有3.5亿患者转化为慢性乙型肝炎,而世界每年约有60万乙肝患者死亡。我国作为发展中国家,同时也是乙型肝炎的高发区,全国约有1亿乙肝病毒携带者,而慢性乙型肝炎患者更是高达2000万人。虽然,目前预防HBV感染的疫苗已相当成熟,但由于HBV侵染宿主的范围狭窄,在选择实验动物开展相关研究时存在较大限制,导致目前对HBV的侵染机制知之甚少,特别是慢性乙型肝炎的发生机制,从而无法制定有效的治疗策略。树鼩作为灵长类的近亲,由于其对HBV易感且具有个体小、易于饲养等优点,现已成为HBV研究的理想动物模型。目前,针对树鼩免疫系统,特别是一些免疫细胞的标志研究较少,这严重阻碍了树鼩作为一种理想的HBV感染动物模型的进一步应用。对树鼩免疫系统的研究将有可能揭示HBV与宿主间的相互作用,有助于乙型肝炎的预防和治疗。大量实验证明调节性T淋巴细胞(Treg)与各类癌症的发生有着密切的关系,而树鼩Treg细胞的相关标志分子的编码序列却未有报道。因此,本实验以获得树鼩T...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 乙型肝炎病毒及其研究现状
        1.1.1 乙型肝炎病毒基本特征
        1.1.2 黑猩猩乙型肝炎动物模型
        1.1.3 HBV转基因小鼠动物模型
        1.1.4 HBV类似病毒的研究
        1.1.5 树鼩相关背景介绍
    1.2 调节性T淋巴细胞—Treg概述
        1.2.1 CD4\CD127的背景概述
第二章 引言
    2.1 研究目的及意义
    2.2 研究范围和内容
第三章 树鼩CD4/CD127基因的克隆及分子特征分析
    3.1 材料
        3.1.1 实验动物及动物组织来源
        3.1.2 菌种与质粒
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 仪器耗材
        3.1.5 试剂配制
    3.2 方法
        3.2.1 血液总RNA的提取
        3.2.2 树鼩CD4、CD127全长编码序列的特异性引物设计
        3.2.3 RT-PCR扩增目的基因
        3.2.4 DH5α感受态细胞的制备
        3.2.5 T/A克隆
        3.2.6 质粒小提及酶切鉴定
        3.2.7 测序及序列分析
    3.3 结果与分析
        3.3.1 树鼩CD4、CD127全长编码序列的扩增
        3.3.2 树鼩CD4、CD127核酸序列分析
        3.3.3 树鼩CD4、CD127的氨基酸序列分析结果
        3.3.4 树鼩CD4、CD127蛋白三维空间结构建模分析
    3.4 讨论
        3.4.1 树鼩CD4、CD127扩增
        3.4.2 树鼩CD4、CD127氨基酸及蛋白空间结构分析
第四章 树鼩CD4慢病毒真核表达载体的构建及表达
    4.1 材料
        4.1.1 菌种与质粒
        4.1.2 细胞
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 试剂配制
        4.1.5 仪器耗材
    4.2 方法
        4.2.1 慢病毒真核表达载体的重组构建
        4.2.2 细胞转染用高纯度质粒的提取
        4.2.3 真核慢病毒表达载体转染与感染
    4.3 结果与分析
        4.3.1 树鼩CD4慢病毒载体的重组构建
        4.3.2 树鼩CD4重组慢病毒载体的真核表达
    4.4 讨论
第五章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
参考文献
在校期间发表论文
致谢



本文编号：3997880