BMSC细胞外基质对脂肪间充质干细胞生物学活性的影响

发布时间：2024-11-02 06:33

　　 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)衍生的细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)对脂肪间充质干细胞(Adipose stem cells,ADSCs)增殖及多向分化能力的影响。方法:制备BMSCs衍生的ECM材料(BM-dECM),利用H&E染色、免疫荧光染色以及DNA检测方法对BM-dECM进行表征。将ADSCs分别接种于BM-dECM包被的培养皿以及空白培养皿中,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组ADSCs的增殖能力;利用RT-PCR检测两组ADSCs成骨、成脂以及成软骨分化相关基因的表达。结果:H&E染色结果显示BM-dECM呈连续的膜状结构,细胞核被大部分脱除;免疫荧光染色显示BM-dECM保留了BMSCs分泌的细胞外基质成分;DNA含量检测证明脱细胞后ECM中DNA含量下降为17. 72±3. 24ng/μl;CCK-8检测显示,与对照组相比BM-dECM显著促进ADSCs增殖;RT-PCR结果显示BM-dECM在一定程度上促进了ADSCs成骨分化相关基因的表达,抑制了成脂以及成软骨相关基因的表达。结论:BM-dECM可以有效...

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【部分图文】：

对BM-dECM材料进行H&E染色结果显示，BM-dECM材料结构良好，蓝紫色的细胞核已经被大部分脱除，粉色的细胞外基质成分得以保留(图1)。通过此种脱细胞方法处理所得的BM-dECM呈一层均匀且致密的形貌，保持了连续的膜状形态。2.1.2免疫荧光染色结果

使用Fibronectin、CollagenI、CollagenIV抗体对BM-dECM材料进行免疫荧光染色，BM-dECM材料中纤连蛋白和胶原纤维结构清晰可见(图2)，证明所制备的BM-dECM很好地保留了BMSCs分泌的细胞外基质中的纤维蛋白和蛋白多糖等成分，可以仿生细胞....

DNA定量检测结果显示未进行脱细胞处理的细胞片中DNA含量为73.96±10.20ng/μl，脱细胞后BM-dECM材料中DNA的量下降为17.72±3.24ng/μl，差异有统计学意义(P<0.05)(图3)，极大的降低了BM-dECM材料的免疫原性。结合H&E染色结果证实....

CCK-8检测结果显示：BM-dECM组和对照组中ADSCs细胞数量都随着时间增加而呈现不断增加的趋势。第1天时两组间OD值没有差异(P>0.05)；随后3、5、7天均检测到BM-dECM组的OD值要高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(图4)。结果表明BM-dECM材....

本文编号：4009180