刚地弓形虫微线蛋白16基因片段原核表达、纯化及免疫反应性分析

发布时间：2024-12-02 23:09

　　 目的原核表达刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）微线蛋白16（micronemal protein 16,Tg MIC16）的3个基因片段,并分析3个重组蛋白的免疫反应性。方法参照Gen Bank中Tg MIC16基因序列,根据功能活性区将其分为3个片段（M16D1、M16D2、M16D3）,分别设计引物,以刚地弓形虫RH株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR扩增,获得预期的3个DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体p ET-32a（+）,将重组质粒转化入大肠埃希菌（Escherichia coli）TOP10,经PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosetta,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测表达产物。重组蛋白经镍柱纯化后,分别以抗组氨酸（His）单抗和弓形虫感染兔血清为一抗,Western blotting分析其免疫反应性。结果 Tg MIC16 3个基因片段的RT-PCR扩增产物分别为1 806、1 290、855 bp。双酶切和测序结果显示,3个Tg MIC16片段...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫株、菌株与质粒载体
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 Tg MIC16基因的分段扩增
    1.5 原核表达载体的构建及转化
    1.6 重组蛋白的分段诱导表达
    1.7 重组蛋白的纯化
    1.8 Western blotting分析
2 结果
    2.1 Tg MIC16 PCR扩增结果
    2.2 重组质粒的鉴定
    2.3 重组蛋白的SDS-PAGE分析
    2.4 重组蛋白的纯化
    2.5 重组蛋白的Western blotting分析
3 讨论



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